[发明专利]一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其检测方法

权利要求书

1.一种治疗治疗心脑血管疾病的中药组合物，其特征在于该中药组合物的原料药组成为：

丹参300-500重量份、川芎150-300重量份、葛根150-300重量份。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物的原料药组成为：

丹参350-450重量份、川芎200-250重量份、葛根200-250重量份。

3.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物的原料药组成为：

丹参400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份。

4.如权利要求1-3任意一项所述的中药组合物，其特征在于：它是胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、口服液。

5.如权利要求1-3任意一项所述的中药组合物颗粒剂的制备方法，其特征在于：

以上述原料药，第一次1-3小时，第二次0.5-1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.20的稠膏，加糊精300--600重量份、甜菊素1.5-5重量份，制成颗粒500-1000重量份，即得。

6.如权利要求1-3所述的任一中药组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定方法中的一种或几种：

A.葛根的定性鉴别 取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙酸乙酯10-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，挥干，残渣加甲醇0.5-2ml溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15-40∶5-20∶0.5-2比例的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B.丹参的定性鉴别 取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加30-70mL50-80％乙醇溶液超声提取10-40min，滤过，滤液蒸至近干，加水10-30mL充分溶解，用稀HCl调PH值至1～2，用乙醚提取2-4次，每次10-30mL，合并乙醚液，用无水硫酸钠脱水，滤过，蒸干乙醚，残渣加0.5-2ml乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙醇溶解，制成1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液3-7ul，样品溶液10-20uL，分别点于同一硅胶G板上，以10-30∶2-6∶0.5-2比例的氯仿-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铁乙醇溶液，用风筒吹至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；

C.川芎的定性鉴别 取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加50-80％乙醇30-70mL，超声提取20-40min，滤过，滤液蒸至近干，加水10-30mL充分溶解，用乙酸乙酯提取1-4次，每次10-30mL，合并乙酸乙酯层，用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残留物加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.5g，加乙酸乙酯10-30mL，超声提取10-30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液3～5uL供试品溶液10uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5-15∶0.5-2比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，预饱和10-20min，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同的荧光斑点；

D.丹参的定性鉴别 取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙醚10-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，挥干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为样品液；另取丹参酮II A对照品，加入醋酸乙酯制成每1ml含2mg的对照品液；再取丹参对照药材0.5-2g，置于具塞试管中，加入乙醚5ml振摇，放置1h，过滤，滤液挥干，残渣加入醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，取上述4种溶液各5-15uL，点于同一硅胶G薄层板上，以10-30∶0.5-2比例的苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，晾干，置于日光下检视，供试品、丹参酮IIA对照品、丹参对照药材在相应位置上显相同颜色斑点；

含量测定方法

A.丹参含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以4-12∶80-100比例的甲醇-1％醋酸溶液为流动相；检测波长为280nm；理论板数按丹参素峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备 取丹参素钠对照品适量，精密称定，加30-70％甲醇制成每1ml含20-80μg的溶液(相当于每1ml含丹参素18-72μg)，即得；

供试品溶液的制备 取本药物组合物制剂或内容物适量，研成细粉，取约0.3-0.8g，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加入30-70％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHZ)3-10分钟，放冷，再称定重量，用30-70％甲醇补充减失的重量，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5-15μl，注入液相色谱仪，测定，丹参含量以丹参素纳含量计每次服用量不得少于10.0mg，即得；

B.葛根含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以15-35∶65-85比例的甲醇-水为流动相；检测波长为250nm，理论板数按葛根素峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品适量，加20-50％乙醇制成每1ml含10.0-20.0ug的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取0.3-0.8g，置具塞锥形瓶中，精密加20-50％乙醇30-70ml，称定重量，加热回流20-40min，放冷，再称定重量，用20-50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，葛根含量以葛根素计每次服用量不得少于1.6mg，即得；

C.川芎含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以20-50∶50-70∶0.5-2比例的甲醇-水-冰醋酸为流动相；检测波长为323nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于2000，柱温25℃；

对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含20.0-40.0ug的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取5.0-10.0g，溶于10-30ml蒸馏水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10-20ml，合并乙醚液于50℃水浴中挥干，残渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，过滤，得供试品溶液；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，川芎含量以阿魏酸计每次服用量不得少于1.2mg，即得。

7.如权利要求6所述的中药组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别方法：

A.葛根的定性鉴别 取0.625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，挥干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25比例的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B丹参的定性鉴别 取0.625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加50mL70％乙醇溶液超声提取30min，滤过，滤液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用稀HCl调PH值至1～2，用乙醚提取3次，每次20mL，合并乙醚液，用无水硫酸钠脱水，滤过，蒸干乙醚，残渣加1mL乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙醇溶解，制成1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液5uL，样品溶液15uL，分别点于同一硅胶G板上，以20∶4∶1比例的氯仿-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铁乙醇溶液，用风筒吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；

C.川芎的定性鉴别 取0.625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加70％乙醇50mL，超声提取30min，滤过，滤液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯层，用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残留物加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.5g，加乙酸乙酯20mL，超声提取20min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液3～5uL供试品溶液10uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，预饱和15min，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同的荧光斑点；

D.丹参的定性鉴别 取0.625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙醚10-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，挥干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为样品液；另取丹参酮II A对照品，加入醋酸乙酯制成每1ml含2mg的对照品液；再取丹参对照药材1g，置于具塞试管中，加入乙醚5ml振摇，放置1h，过滤，滤液挥干，残渣加入醋酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，取上述4种溶液各10uL，点于同一硅胶G薄层板上，以19∶1比例的苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，晾干，置于日光下检视，供试品、丹参酮IIA对照品、丹参对照药材在相应位置上显相同颜色斑点；

含量测定方法

A.丹参含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1％醋酸溶液(8∶92)为流动相；检测波长为280nm，理论板数按丹参素峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备 取丹参素钠对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液(相当于每1ml含丹参素45μg)，即得；

供试品溶液的制备 取本药物组合物制剂或内容物适量，研成细粉，取约0.5g，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加入50％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHZ)5分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补充减失的重量，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，丹参含量以丹参素纳含量计每次服用量不得少于10mg，即得；

B.葛根含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以甲醇-水(25∶75)为流动相；检测波长为250nm，理论板数按葛根素峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品适量，加30％乙醇制成每1ml含16.0ug的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加30％乙醇50ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，葛根含量以葛根素计每次服用量不得少于1.6mg，即得；

C.川芎含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以甲醇-水-冰醋酸(40∶60∶1)为流动相；检测波长为323nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于2000，柱温25℃；

对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含30.0ug的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取8.0g，溶于20ml蒸馏水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10ml，合并乙醚液于50℃水浴中挥干，残渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，过滤，得供试品溶液；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，川芎含量以阿魏酸计每次服用量不得少于1.2mg，即得。