[发明专利]HULC siRNA及其在制备治疗肝癌的药物中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及HULC siRNA、表达针对HULC的siRNA的表达载体、包含该表达载体的宿主细胞、活性成分为所述针对HULC的siRNA或所述表达载体的组合物。本发明还涉及一种用于治疗肝癌的试剂盒，其含有所述针对HULC的siRNA或所述表达载体。本发明还涉及所述针对HULC的siRNA或所述表达载体在制备治疗肝癌的药物中的用途以及HULC作为肝癌的治疗靶点的用途。

背景技术

肝癌是全球范围内致死率最高的肿瘤之一，而我国又是肝癌的高发国家，每年有超过30万的病人死于肝癌。作为一个多因素的遗传性疾病，肝癌的病因非常复杂，目前肝癌诊疗中存在着早期诊断难、复发转移率高、创新药物和治疗手段少等问题，因此，对肝癌分子发病机制及肝癌诊治新技术、新疗法的研究尤为重要和迫切^[1]。miRNA是一种小分子的非编码RNA，它的机制与siRNA类似，与靶mRNA结合后抑制mRNA的翻译。多个研究发现，在肿瘤组织中，miRNA的表达谱发生了明显的变化，它被认为是肿瘤诊断的标志物以及治疗的工具^[2]。2009年6月《Cell》杂志报道，美国的Janaiah Kota等人发现将一种在肝癌中低表达的miRNA重新导入小鼠肝癌模型中可以引起肿瘤细胞特异性的凋亡并且无毒性，从而治疗肿瘤^[3]。这些通过导入非编码RNA来治疗肝癌的研究成果为肿瘤的治疗提出了新的方向。

非编码RNA(non-coding RNA，ncRNA)，是指那些由DNA转录却并不翻译成蛋白的RNA，主要包括snoRNA，miRNA，siRNA，piRNA以及一些长片段的非编码RNA等^[4]。这些ncRNA分子通过不同的机制，如RNA-RNA碱基配对，RNA蛋白相互作用，RNA-DNA相互作用等，在细胞调控的各个层面中发挥功能，包括参与染色质修饰、转录调节、剪切加工、RNA稳定性调节等。近来还有研究发现，在一些肿瘤组织 中，ncRNA有着过表达或者低表达的现象。提示在肿瘤的发生发展过程中，它们可能发挥着重要的作用^[5，6，7]。细胞增殖、分化以及凋亡的异常导致肿瘤的发生，而ncRNA作为一个重要调控单位，参与调控相关基因的表达，它们的异常表达有可能引起这些现象的发生。随着越来越多肿瘤特异性ncRNA的发现以及对这些ncRNA在肿瘤发生发展中分子机制的深入研究，在不远的将来它们不仅能作为早诊、预后的标志物，甚至可以成为肿瘤治疗的靶位点，帮助人类早日战胜肿瘤。

2007年，研究者们在肝癌中发现了一种明显表达升高的基因，并将它命名为HULC，即Highly Up-reglated in Liver Cancer，其在NCBI上的基因序列号为NR_004855.2。这个基因定位于6p24.3，含有一个内含子和两个外显子，其中内含子长度为1152bp，两个外显子分别为182bp和303bp。HULC基因转录产物经过剪切和加工后形成一个500bp的RNA，具有类似于mRNA的polyA尾结构。但通过序列比对，在现在已知的任何物种的蛋白中都不含这种氨基酸序列。用这72个预测的氨基酸制备抗体，在HULC RNA高表达的肝癌组织中检测，也未能发现目的条带。同时通过体外翻译的实验，也进一步证实了该序列并不编码蛋白，即HULC是一种长片段的非编码RNA^[8]。该研究由KatrinPanzitt等人发表在07年Gastroenterology杂志上，另外Matouk等人在2009年的Eur J Gastroenterol Hepatol杂志上发表关于HULC RNA不仅在原发的肝癌组织中高表达，并且在结肠癌肝转移的组织中也检测到其高表达^[9]。由于HULC RNA除了在肝癌组织中高表达还能在肝癌病人的血液中检测到其高表达，所以它可以作为一种潜在的肝癌标志物应用到诊断中，甚至在不久的将来有可能会应用到肝癌的治疗中。但截至目前，现有研究仅证明HULC在肝癌或结肠癌肝转移的组织高高表达，尚未知晓该高表达是肝癌发展的结果还是肝癌发展的原因。