[发明专利]一种病毒采样液组合物

说明书

技术领域

本发明涉及病毒检验检疫领域，尤其涉及保存病毒样品的方法和试剂。

背景技术

病毒是由一个核酸分子(DNA或RNA)与蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生活的生命体。病毒有高度的寄生性，完全依赖宿主细胞的能量和代谢系统，获取生命活动所需的物质和能量。早在公元前1400年人类就有了病毒感染的记载，但直到19世纪末病毒才开始逐渐被发现和鉴定。病毒能引起动物、植物及人类的各种疾病，对人类的生存和健康造成极大的威胁，如人类免疫缺陷病毒、埃博拉病毒、SARS、H1N1等，均对人类及动物造成极大威胁。

病毒感染检测有赖于病毒分离鉴定、病毒基因检测、病毒特异性抗原检测等方法，这些都必须建立在采集到高质量的标本的基础之上。现在常规的病毒采样方法是用拭子插拭咽部等带病毒部位，然后将拭子浸泡在MEM或Hank’s等缓冲液中，再送入实验室进行病毒分离及病毒基因、抗原的检测。由于从样品采集到实验室检测有一定的时间间隔，样品需经过运输及低温保存等过程，使得病毒活力下降，病毒核酸、抗原等遭到降解，阳性检出率远低于临床诊断。据统计，流感咽拭子标本仅有10-20％能分离到流感病毒，这极大影响疾病诊断、流行病学研究以及疫苗和抗病毒药物的研究，这一直是病毒学临床及研究工作的一大瓶颈。

发明内容

本发明的目的是提供一种病毒采样液，用于保存从人体获得的病毒样本，克服现有技术中病毒样本在保存中失活或降解的问题。

本发明提供了一种病毒采样液，包含以下组分：

海藻糖            2％-4％

或牛血清白蛋白    2％-4％

或右旋糖酐        1％-3％

谷氨酸钠          1％

明胶              1％-2％

甘氨酸    1-3％

蔗糖      2％

以上组分用Hank’s液溶配制，组分浓度为每100mL采样液中该组分的质量(克)，采样液的PH值为7.3±0.2。

在一个优选的方案中，采样液中加入50-150ug/ml的万古霉素、2-6ug/mL的两性霉素B、5-10ug/ml的粘霉素；再加入5-15ug/ml的酚红；用Hank’s液定容到500mL。

配置好的病毒采样液装入病毒采集管中，每管3mL，每管放入3mm直径的玻璃珠3颗，加盖密封后，γ-射线消毒。

本发明的病毒采样液采用海藻糖、明胶、L-谷氨酸等病毒保护剂，抑制了病毒核酸、蛋白的降解，可以使病毒保持活力更长时间，方便病毒样品的采集，提高病毒基因、特异性蛋白检测率及病毒分离率。

具体实施方式

本发明所用的流感病毒H1N1病毒样本、肠道病毒EV71样本由南京医科大学提供。本发明采用的MDCK细胞为狗肾细胞，ATCC号为CCL-34，作为宿主细胞用于培养流感病毒。本发明采用的“肠道病毒EV71定量PCR试剂盒”为中山大学达安基因股份有限公司产品，货号为2010002。本发明采用的万古霉素、两性霉素B、粘霉素为生工生物工程(上海)有限公司产品。Hank’s按照参考文献(郭元吉，程小雯.流行性感冒病毒及其实验技术.北京：中国三峡出版社，1997)的方法配制。本发明采用的其他试剂均为国产分析纯试剂。

实施例1、病毒采样液组合物的配制

(1)配方1

海藻糖    3％

谷氨酸钠  1％

明胶      1％

甘氨酸    2％

蔗糖      2％

按比例称取以上组分，各组分浓度为每100毫升采样液中该组分的质量(克)。上述组分用450毫升的Hank’s液溶解，用NaHCO₃调PH至7.3±0.2(25℃)；加入万古霉素(100ug/ml)、两性霉素B(4ug/mL)、粘霉素(7.5ug/ml)；再加入10ug/ml的酚红；用Hank’s定容到500毫升。

(2)配方2

用牛血清白蛋白(2％)替代配方1中的海藻糖，其他同配方1。

(3)配方3

用右旋糖酐(2％)替代配方1中的海藻糖，其他同配方1。

上述各种配方的病毒采样液装入病毒采集管中，每管3ml，每管放入3mm直径的玻璃珠3颗，加盖密封后，γ-射线消毒。

实施例2、病毒采样液保存流感病毒H1N1的效果观察