[发明专利]野生茄子耐盐基因StBADH基因及其植物表达载体

权利要求书

1.野生茄子耐盐基因StBADH，其特征在于该基因的序列为SEQ ID NO. 1。

2.野生茄子耐盐基因StBADH植物表达载体，其特征在于由权利要求1所述的野生茄子耐盐基因StBADH与植物表达载体构成。

3.根据权利要求2所述的野生茄子耐盐基因StBADH植物表达载体，其特征在于所述的植物表达载体为分别用Hind III/EcoR I双酶切植物载体pBI220和pCAMBIA1301，回收pBI220中的1250 bp的小片段与pCAMBIA1301中的11787 bp的大片段，连接得到的中间载体pCAMBIA1301-BI220。

4.权利要求2所述的野生茄子耐盐基因StBADH植物表达载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

1） 野生茄子耐盐基因StBADH的克隆

选用野生茄子作为试验材料，取幼嫩叶片，提取总RNA，取其2 μg反转录cDNA，用RNase消化cDNA产物，根据NCBI上公布的番茄（Solanum lycopersicum）amadh2序列信息设计特异引物，进行高保真聚合酶链式PCR反应，在合成的野生茄子叶片cDNA中扩增含Sma I 和Sac I两个酶切位点的StBADH，PCR产物用凝胶回收试剂盒回收纯化；

2） StBADH加多聚腺苷酸‘PolyA’尾反应

按照DNA A-Tailing试剂盒说明，以步骤1）得到的PCR纯化产物为反应底物，在StBADH基因3’端加上多聚腺苷酸‘PolyA’尾；StBADH加‘PolyA’尾反应的产物连入pMD19-T载体中，转化TOP10感受态细胞，测序验证，得到pMD-StBADH；

3） 中间载体pCAMBIA1301-BI220的构建

植物载体pBI220与pCAMBIA1301分别Hind III/EcoR I双酶切，回收pBI220中1250 bp的小片段与pCAMBIA1301中11787 bp的大片段，用T₄ DNA连接酶连接，连接产物转化TOP10感受态细胞，质粒用AxyPrep质粒DNA小量试剂盒提取纯化，Hind III/EcoR I双酶切验证，得到构建成功的中间载体pCAMBIA1301-BI220；

4） StBADH植物表达载体pCAMBIA1301-StBADH-BI220的构建

含Sma I 和Sac I两个酶切位点的pMD-StBADH与中间载体pCAMBIA1301-BI220分别Sma I/Sac I双酶切，回收pMD-StBADH中1526 bp的小片段与pCAMBIA1301-BI220中13029 bp的大片段，用T₄ DNA连接酶连接，连接产物转化TOP10感受态细胞，质粒用AxyPrep质粒DNA小量试剂盒提取纯化，Sma I/Sac I双酶切验证，得到构建成功的植物表达载体pCAMBIA1301-StBADH-BI220。