[发明专利]稻瘟病菌无毒基因Avr-Pit的分子标记检测方法及其引物无效
| 申请号： | 201010506165.8 | 申请日： | 2010-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN101942521A | 公开（公告）日： | 2011-01-12 |
| 发明（设计）人： | 张正光;董妍涵;王源超;郑小波;董莎萌 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京知本村知识产权代理事务所 11039 | 代理人： | 周自清 |
| 地址： | 21009*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 稻瘟病 无毒 基因 avr pit 分子 标记 检测 方法 及其 引物 | ||
1.一种检测稻瘟病菌无毒基因Avr-Pit的分子标记引物，其特征在于：其上游引物序列如SEQ ID No.1所述，下游引物序列如SEQ ID No.2所述。
2.一种检测稻瘟病菌无毒基因Avr-Pit的分子标记引物，其特征在于：其上游引物序列如SEQ ID No.3所述，下游引物序列如SEQ ID No.4所述。
3.一种稻瘟病菌无毒基因Avr-Pit的分子标记检测方法，其特征在于：利用权利要求1所述的引物扩增待测稻瘟病菌基因组DNA，取扩增产物用酶EarI进行酶切，然后对酶切片段进行凝胶电泳，若出现两条长度分别为268bp和101bp的片段，则待测稻瘟病菌基因组含有无毒基因Avr-Pit。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：EarI酶切体系为：10×4buffer 2.0μl，DNA 0.5μg，EarI酶0.5μl，加无菌超纯水至20μl。
5.一种稻瘟病菌无毒基因Avr-Pit的分子标记检测方法，其特征在于：利用权利要求2所述的引物扩增待测稻瘟病菌基因组DNA，取扩增产物用酶PciI进行酶切，然后对酶切片段进行凝胶电泳，若出现两条长度分别为472bp和382bp的片段，则待测稻瘟病菌基因组含有无毒基因Avr-Pit。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：PciI酶切体系为：10×3buffer 2.0μl，DNA 0.5μg，100×BSA 0.2μl，PciI酶0.5μl，加无菌超纯水至20μl。
7.根据权利要求3至6任一项所述的检测方法，其特征在于：扩增待测稻瘟病菌基因组DNA的PCR反应体系为：10×Ex Taq buffer 5.0μl，MgCl22mM，dNTPs 0.2mM，Ex Taq DNA聚合酶1.25U，上、下引物各为0.5μM，模板DNA 2.5ng，加无菌超纯水至50μl；PCR反应参数为：94℃预变性5min；94℃变性30S，57℃退火30S，72℃延伸1min，31个循环；72℃延伸8min。
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