[发明专利]一种运用一步RT-PCR法检测犬瘟热病毒的方法无效
| 申请号： | 201010505722.4 | 申请日： | 2010-10-13 |
| 公开（公告）号： | CN101974653A | 公开（公告）日： | 2011-02-16 |
| 发明（设计）人： | 吴红云;李建正;范金红 | 申请（专利权）人： | 郑州后羿制药有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 451161 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 运用 一步 rt pcr 检测 犬瘟热 病毒 方法 | ||
1.一种运用一步RT-PCR法检测犬瘟热病毒（CDV）的方法，其特征在于：针对GenBank中CDV 的N基因设计一对特异性引物，序列如下：
上游引物CDV 1：5’-GGTCGGAGAATTTAGAATGAAC-3’；
下游引物CDV 2：5’-CCAAGAGCCGGATACATAG-3’；
以CDV 1/ CDV 2为引物，扩增产物大小为240bp。
2.根据权利要求1所述的运用一步RT-PCR法检测犬瘟热病毒的方法，所述的检测方法包括以下步骤：
1）犬瘟热病毒样品总RNA提取，并测提取后总RNA的浓度；
2）一步RT-PCR法扩增CDV 的N基因片段；
3）取扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。
3.根据权利要求2所述的运用一步RT-PCR法检测犬瘟热病毒的方法，其特征在于：步骤2）所述的一步RT-PCR反应体系为：
总RNA溶液 10μl
dNTPs（2.5mM） 5.0μl
10×Taq Buffer 5.0μl
MgCL2 （2.5mM） 10μl
引物CDV 1（20μM） 2.0μl
引物CDV 2（20μM） 1.0μl
Ex-Taq聚合酶（5U/μl） 0.5μl
M-MuLV反转录酶（200U/μl） 1.0μl
RNasin（40U/μl） 1.0μl
DEPC-H2O 14.5μl
总体积 50μl。
4.根据权利要求2所述的运用一步RT-PCR法检测犬瘟热病毒的方法，其特征在于：步骤2）所述的一步RT-PCR反应程序为：42℃反转录30min，94℃灭活反转录酶2min，预变性94℃2min；然后94℃1min，52℃1min，72℃1min，此步骤为一个循环，共40个循环；最后72℃延伸10min。
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