[发明专利]一种靶向丙型肝炎病毒F基因的结构及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种靶向丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)F基因的广谱的小分子干扰RNA，更具体的涉及具有抑制1b亚型HCV F基因表达的小分子干扰核糖核酸及其应用。

背景技术

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是丙型肝炎的病原体。在欧美发达国家，HCV感染是肝硬化和原发性肝癌的首要原因，非洲等欠发达国家的HCV感染率高达10％以上，我国HCV感染率近3％，其中约75％发展为HCV慢性肝炎，约20％最终发展为肝硬化、肝癌等终末期肝病(中华肝脏病杂志，2004，12：194-198)。国家卫生部2009年1月公布的全国法定报告传染病疫情显示，HCV感染发病数与死亡数均居前5位。

HCV基因型分为6个基因型与不同的亚型，日本国立传染性疾病研究院通过对亚洲多个国家HCV感染患者进行基因组分析发现，基因型为1b的患者较其他患者更易发生较为严重的肝脏疾病如肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，并且对干扰素的治疗不敏感(Pediatr Int，2004，46(2)：223-230)。我国大部分地区主要流行的HCV型为基因型1b，在南方城市基因型1b感染率达90％以上，且基因型1b在慢性肝炎、肝硬化和肝癌中占80％以上。

HCV属黄病毒属，全长约9.6kb，为一单股正链RNA，分为5’非翻译区(UTR)、一个开放阅读框(ORF)和3’非翻译区，编码一个由3000多个氨基酸组成的复合蛋白前体，在宿主信号肽酶和病毒蛋白酶的作用下裂解产生至少10种基因产物：四种结构蛋白(Core、E1、E2、p7)和六种非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。

研究表明，HCV Core蛋白(C蛋白)与肝炎慢性化感染及肝癌的发生发展有关。近年来，研究者在感染HCV的患者血清中发现了一种新的蛋白，现称为F蛋白，它是HCV C基因编码的另一个产物，由C基因密码子核苷酸移位而产生(EMBO J，2001，20(14)：3840-3848)。已有的研究表明，HCV自然感染过程中可同时产生C与F蛋白，且F蛋白的变异高于C蛋白(Hepatology，2007，46(6)：1704-1712)。在HCV所致HCC患者体内，F蛋白的数量、抗体阳性率以及基因序列的突变率均显著升高，提示F蛋白可能与肝癌的发生发展有关。

用35S标记技术研究了F蛋白在无细胞翻译体系以及Huh7细胞内的半衰期，发现F蛋白是一个短寿命蛋白，半衰期小于10分钟(J Gen Virol，2003，84(7)：1751-1759)。短寿命意味着F蛋白很可能是一种调节性蛋白。C蛋白、NS5A蛋白等7种HCV蛋白质以复合体形式分布在内质网上，该复合体是HCV病毒复制的场所(Hepatology，2003，38：468A-469A)。现已证实F蛋白分布在内质网上，推测F蛋白也许是内质网上HCV蛋白复合体的成员之一，可能参与调节HCV RNA的复制以及病毒颗粒的形成(J Virol，2003，77(2)：1578-1583)。

F蛋白既有很高的保守性又有很大的变异性。不同基因型HCV均能编码F蛋白，相同基因型HCV产生的F蛋白高度保守。对102株HCV 1b基因型的F蛋白、C蛋白、NS2蛋白进行分析，发现F蛋白的125个aa中有116个aa相同，保守性为85％，C蛋白保守性为97％(185/191)，NS2蛋白保守性为78％(167/214)(RNA，2002，8(5)：557-571)。F蛋白的高保守性意味着其可能肩负有重要功能。有研究结果显示，不同基因型HCV所编码的F蛋白在一级结构上存在很大变异性，型间的同源性较低。F蛋白的这些特性提示其在HCV病毒的生命周期中可能具有重要作用，同时又对于HCV病毒的变异逃逸以及对抗干扰素疗效发生影响。