[发明专利]SJ16重组蛋白及其在制备血吸虫病疫苗、诊断试剂、治疗药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制剂，尤其是涉及SJ16蛋白在制备血吸虫病疫苗、诊断试剂、治疗药物中的应用。

背景技术

血吸虫病是危害人民身体健康最重要的寄生虫病。医药业界普遍认为研制血吸虫疫苗可能是控制血吸虫流行最终措施。血吸虫疫苗的研究已有60多年的历史，至今尚未找到一种真正有价值的疫苗。其原因是多方面的，但人们对血吸虫感染的保护性免疫机制及血吸虫逃避机体免疫攻击的机制的认识不足可能是一个重要原因。现已有十余个被公认有前途的日本血吸虫(中国大陆栋)亚单位候选抗原在国内获得了克隆和表达.如，如谷胱甘肽转移酶、副肌球蛋白、脂肪酸结合蛋白和23ku膜蛋白等，但其中大多数候选疫苗分子尚未达到所要求的等于或大于40％减虫率的免疫保护力。

血吸虫病的早期诊断也是一个尚未解决的难题。感染血吸虫1个月后，感染者的粪便中才能检测到虫卵，而特异性抗体的出现时间一般在感染后1周左右，且针对抗原的血清抗体在宿主体内长期存在，不能区分早期和既往感染，没有疗效考核价值。此外，目前用于检测特异性抗体的诊断抗原主要是成虫抗原和虫卵抗原，但这类抗原成分复杂，也不易大量获得。一般认为宿主体内(体液中)存在血吸虫抗原，表明有活动性感染的可能，故检测宿主体内是否存在血吸虫循环抗原，可用于血吸虫病的诊断和疗效。但循环抗原进入血液系统后，以抗原抗体复合物的形式存在，降低了检测的灵敏度，给诊断带来了困难。特别是慢性血吸虫病患者感染度普遍偏低，血清和尿液中检测循环抗原的阳性率较低。在慢性血吸虫病患者血清中，由于CAg不断与血清抗体结合形成血吸虫循环免疫复合物(CIC)，故CAg含量较少。目前尚缺乏能实际应用的抗原检测试剂。

学者们也为解决血吸虫病疗效考核的方法问题作了大量研究。目前国内外在研究短程抗体的检测方面取得了较大进展，如：用抗独特型抗体，重组抗原，或用某些血吸虫抗原组分对抗体亚类进行检测。但敏感性不及检测总抗体者为高，故对其应用价值还有待于进一步探索。

综上，寻求新的血吸虫病疫苗候选分子和具有早期诊断价值的血吸虫生物标志物是当前血吸虫病诊断技术实现突破的关键。我们注意到，日本血吸虫(S.japonicum)Sj16是虫体分泌蛋白，其基因序列已被克隆，并建立了重组表达体系。但尚未有人对SJ16进行在诊断和免疫预防中的价值的研究。

发明内容

本发明对SJ16蛋白在血吸虫病诊断和免疫预防中的价值进行了研究，目的在于提供一种含有活性成分的SJ16重组蛋白，并提供含有活性成分基因编码所述的融合蛋白的多核苷酸及该多核苷酸序列相应的核酸构建体系、表达载体和宿主细胞。

进一步的目的在于提供一种日本血吸虫疫苗。

再进一步的目的在于，将SJ16蛋白作为诊断抗原，制备克隆抗体，并由此提供一种日本血吸虫病诊断试剂及其使用方法。

更进一步的目的在于，在此研究的基础上提供治疗日本血吸虫病的药物。

具体的技术方案为：

一、关于SJ16重组蛋白及带活性基因编码的多核苷酸

首先，我们对SJ16蛋白全长序列(SEQ ID NO：4)进行了分析，发现有2个核定位序列肽段。分别将这两个核定位序列肽段去除，或同时去除，得到了三个不同的活性成分片段。SJ16在本发明中的作用，包括SJ16在日本血吸虫在诊断方面的应用；SJ16蛋白的疫苗活性成分；并发现SJ16蛋白，以及SJ16蛋白的前、中、后三个活性片段并优选其活性片段应用于诊断和制备血吸虫疫苗。在本发明中，对这三个活性片段分别命名为SJ16-1、SJ16-2、SJ16-3(对应于SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，基因编码见序列表)。

在对全长的SJ16及三个活性片段进行了克隆表达和对小鼠的保护性实验中，证实了SJ16蛋白及这些活性片段或它们的任意组合都能引起特异性免疫反应，对实验动物具有免疫保护作用。并跟据需要针对活性片段进行重组表达，希望得到更优质的活性蛋白。通过实验证明，在重组蛋白中，与SJ16蛋白或其活性片段具有70％以上的同一性的功能性变体或这些功能性变体的组合物都具有较好的免疫保护作用，其中更优选的范围是具有80％以上的同一性的功能性变体或这些功能性变体的组合物。

在对上述SJ16蛋白及其活性片段进行重组多肽的研究结果也表明，含SJ16蛋白活性氨基酸片段的数量为10以上的多肽的免疫保护作用较好。

在此研究的过程中，我们还提供了含有SJ16蛋白活性成分基因编码所述的融合蛋白的多核苷酸及该多核苷酸序列相应的核酸构建体系、表达载体和宿主细胞。

二、应用于制备日本血吸虫病疫苗