[发明专利]SJ16蛋白在制备免疫抑制药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种新型的免疫抑制药物。 

背景技术

免疫抑制剂(immunosuppressant，ISA)是一类具有免疫抑制作用的药物，主要功能为抑制机体异常的免疫反应，从而达到治疗自身免疫性疾病，抗肿瘤，抗器官移植排斥等目的。免疫抑制剂主要的作用机理是，通过抑制与免疫反应有关细胞(T细胞和B细胞等免疫细胞)的增殖和功能，达到降低机体的免疫反应的目的。免疫抑制剂大致可分为四代。第一代以肾上腺皮质激素、雷公藤多苷片、硫唑嘌呤和抗淋巴细胞球蛋白为代表；第二代以环孢素和他克莫司为代表；第三代以单克隆抗体雷帕霉素(抗T淋巴细胞单克隆抗体)、霉酚酸脂(MycophenolateMofetil，MMF)为代表；第四代以抗IL-2受体单克隆抗体为代表。但以上的免疫抑制剂药物均有一定的毒性，增加宿主对感染和肿瘤的易感性；另外也无法抑制慢性排斥反应，是移植器官难以在宿主体内长期稳定存活的主要原因。 

随着分子生物学和基因组学的发展，使从微生物病原体等生物资源中寻找研发有别于现有免疫抑制剂机制的、低毒高效的原创性新的型免疫抑药物成为可能。特别是随着对免疫逃避机制的研究深入，发现了一批与免疫逃避有关的免疫调节分子，与寄生虫主动调节宿主的免疫应答相关，为从微生物病原体中寻求新的免疫抑制剂奠定了基础。 

众所周知，血吸虫是一种多细胞生物，它能在广泛分布免疫细胞的 人体血液系统中存活而不被功能完善的免疫系统清除，提示血吸虫在和人类长期共进化的过程中，可以产生一些可调节宿主免疫应答功能的物质，下调宿主免疫反应，借以逃避宿主的免疫应答。研究发现，当血吸虫尾蚴侵入宿主体内的过程中，在皮肤停留2-3d转化为童虫，在此过程中血吸虫只引起轻微的炎症反应，而死的血吸虫尾蚴或皮内注射死虫的提取物却可以引起强烈的炎症反应。这提示，活的血吸虫可能合成、分泌抑制炎症反应的物质，而这种物质可能有抑制炎症反应的免疫调节功能。SJ16是从血吸虫的分泌物中寻找到一种分子量为16.8kDa的蛋白质。我们于1999年，克隆到SJ16的编码基因，并构建了重组表达体系，其纯化表达产物rSj16可降低和减轻角叉菜胶引起的实验动物皮肤足趾肿胀。同时rSj16可引起实验小鼠的腹腔毛细血管通透性增加，白细胞计数降低，及耳廓肿胀的缩小。这些研究提示SJ16是具有确切抗炎作用的虫源性分子。但尚未有人对SJ16在免疫抑制作用方面进行研究。 

发明内容

本发明对SJ16在免疫抑制作用方面进行了研究。其目的在于提供一种低毒高效的新型生物免疫抑制药物。 

具体的技术方案如下： 

我们猜测SJ16参与了血吸虫的免疫逃避，SJ16作为抗炎分子，很可能具有抑制宿主免疫应答的效应或作用。通过动物实验，证实了以上猜测，证明Sj16具有良好的免疫抑制功能。 

进一步，我们对SJ16基因进行分析，目的在于找出Sj16免疫抑制功能的活性片段及其基因表达序列。通过对SJ16蛋白全长序列(SEQ ID NO：4)进行了分析，发现有2个核定位序列肽段。分别将这两个核定位序列肽段去除，或同时去除，得到了三个不同的活性成分片段。在本发明中，对这三个活性片段分别命名为SJ16-1、SJ16-2、SJ16-3(对应于SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3基因编码见序列表)。 

体外细胞实验表明，Sj16及其活性成分片段或其任意组合物均具有抑制树突状细胞的成熟、抑制T细胞增殖，下调IL-12等细胞因子的表达，抑制TH1和增强TH2的细胞免疫应答的作用。可通过抑制淋巴细胞对组织，特别是对移植物的攻击，或抑制炎症细胞因子的产生与其相关炎症反应；达到免疫抑制的目的。 

根据需要针对活性片段进行重组表达，得到一系列具有免疫抑制作用的重组表达产物。通过实验证明，在重组蛋白中，与SJ16蛋白或其活性片段具有70％以上的同一性的功能性变体或这些功能性变体的组合物都具有较好的免疫抑制作用，其中更优选的范围是具有80％以上的同一性的功能性变体或这些功能性变体的组合物。 

在对上述SJ16蛋白及其活性片段进行重组多肽的研究结果也表明，含SJ16蛋白活性氨基酸片段的数量为10以上的多肽的免疫抑制作用较好。 

在此研究的过程中，我们还提供了含有SJ16蛋白活性成分基因编码所述的融合蛋白的多核苷酸及该多核苷酸序列相应的核酸构建体系、表达载体和宿主细胞。