[发明专利]一种检测精浆γ-L-谷氨酰转肽酶试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物化学试剂盒及检测方法，具体说是一种检测精浆γ-L-谷氨酰转肽酶试剂盒及检测方法。

背景技术

精浆富含γ-L-谷氨酰转肽酶(γ-GT)，γ-GT是谷光苷肽(GSH)代谢的关键酶，在保护精子免受氧自由基损害方面起了重要作用。精液中的γ-GT主要来自前列腺，其活性的检测可用于评价前列腺的功能。精浆中的γ-GT可分解γ-谷氨酰-α-萘酚为游离的α-萘酚，α-萘酚与重氮试剂作用产生红色，其色泽深浅与酶活性成正比。

目前，开展精浆γ-GT活性检测项目的男科实验室极少，我们在前期建立手工检测精浆γ-GT方法的基础上，又进一步建立了半自动生化分析仪检测法。手工检测方法的具体操作过程中，精浆样本需用生理盐水进行1∶200稀释后方可检测，稀释后精浆样本与基质液在37℃温育15min后，再加入重氮试剂，混匀后37℃再次温育5min，然后用分光光度计比色，手工计算获得结果，每次检测所需α萘胺标准液10μl，基质液0.5ml，重氮试剂5ml。该法操作步骤较多，费时、费试剂，且精浆在检测前需稀释，很难在临床常规检测中广泛使用。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了提供一种能使检测精浆γ-GT时操作简便、省时、节省试剂、结果稳定可靠、能广泛适用于临床检测的检测精浆γ-GT试剂盒及检测方法。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所述的一种检测精浆γ-GT试剂盒，包括α萘胺标准液、γ-谷氨酰-α-萘胺基质液和重氮试剂；其中所述α萘胺标准液，浓度为2.86mg/ml；γ-谷氨酰-α-萘胺基质液，浓度为2.71mg/ml；重氮试剂由1g/L亚硝酸钠水溶液与2g/L氨基苯磺酸溶液以1∶4体积比混匀配制而成，每100ml所述氨基苯磺酸溶液中含有20ml醋酸。

按每个试剂盒装载100个测试所需检测试剂计算，所述α萘胺标准液为0.1ml±4μl、γ-谷氨酰-α-萘胺基质液为30ml±1.2ml，重氮试剂为200ml±8ml。

一种用检测精浆γ-GT试剂盒检测精浆γ-GT的方法，该方法包括如下步骤：

1)依据反应原理和仪器性能设定检测参数；

2)在空白管中加入基质液，在标准管中加入标准液和基质液，在样品管中加入精浆和基质液；

3)将步骤2)中的空白管、标准管和样品管同时进行温育，温育时间为15min、温育温度为37℃；

4)再向步骤3)中温育好的空白管、标准管和样品管中加入重氮试剂，混匀后37℃再次温育5min，通过检测仪器进行比色，得出结果。

所述检测仪器为半自动生化分析仪，它的参数为：项目类型为终点法；主波长为510nm；延迟时间为3s；测量时间为3s；项目单位为U/ml；标准浓度为80U/ml；比色皿温度为37℃。

步骤2)中所述的精浆是将液化精液通过3000g离心15min获得的上清液。

有益效果：与我们前期建立的手工法相比，使用本发明中的试剂盒以及用该试剂盒进行检测的方法，能使操作简便、省时，无需进行样品稀释，无需计算仪器直接给出结果；基质液用量为原来的3/5，重氮试剂用量为原来的2/5，从而节省试剂用量；采用本发明，能够作同步对比试验，使得结果稳定可靠，能广泛适用于各级医院的男科实验室。

附图说明

附图为光密度与γ-GT活性的线性关系图。

具体实施方式

下面结合实施例对发明作进一步的详细说明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1：本发明一种检测精浆γ-GT试剂盒，包括α萘胺标准液、γ-谷氨酰-α-萘胺基质液和重氮试剂。其中所述α萘胺标准液，浓度为2.86mg/ml；γ-谷氨酰-α-萘胺基质液，浓度为2.71mg/ml；重氮试剂由1g/L亚硝酸钠水溶液与2g/L氨基苯磺酸溶液以1∶4体积比混匀即可，其中每100ml氨基苯磺酸溶液中含有20ml醋酸。按每个试剂盒装载100个测试所需检测试剂计算，所述α萘胺标准液为0.1ml±4μl、γ-谷氨酰-α-萘胺基质液为30ml±1.2ml，重氮试剂为200ml±8ml。

实施例2：一种用实施例1中的一种检测精浆γ-GT试剂盒进行检测精浆γ-GT的方法，该方法的具体步骤如下：

1)设定检测仪器参数：所述检测仪器为半自动生化分析仪，它的参数为：项目类型为终点法；主波长为510nm；延迟时间为3s；测量时间为3s；项目单位为U/ml；标准浓度为80U/ml；比色皿温度为37℃；