[发明专利]一种竹黄菌发酵生产漆酶的方法

说明书

技术领域

一种竹黄菌发酵生产漆酶（Laccase）的方法，属于生物工程技术领域。本发明涉及利用竹黄菌株（Shiraiasp.） SUPER-H168保藏号为CCTCC NO：M 207104，已在ZL200710132510.4公开，通过液态发酵获得漆酶。

背景技术

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶，具有广泛的底物，不仅能催化氧化多种芳香族化合物，还能降解木质素，去除许多有毒酚类物质如苯氧基类除草剂等的毒性，还可以使多种染料脱色及去除石油工业废水的毒性；因此在造纸、环保、食品、医药卫生、生物检测等领域具有较大的研究和应用价值，近年来，人们对漆酶的研究越来越深入，其应用范围也越来越广泛。

漆酶最早是由日本学者Yoshida于1883年在漆树(Rhus vennicifen)的汁液中发现的，后来由Bertraucl第一次命名为“漆酶(Lacease)”。此后随着研究的深入，发现漆酶广泛存在于多种植物，如马铃薯、毒莴苣、香蕉、桃子、咖啡豆、苜蓿花等，和部分细菌，如节杆菌(Arthrobacter)和链霉菌(Streptomycete)等，以及各种真菌，如担子菌(Basidiomycetes)、子囊菌(Ascomycete)和半知菌(Adelomycete)。此外，一些动物肾脏和血清中也有漆酶的发现。按其来源主要分为漆树漆酶(Rhus Laccase)和真菌漆酶(Fungal Laccase)两大类，其中真菌中的白腐菌(White-rot fungi)是漆酶的主要生产者。

尽管漆酶在自然界中广泛分布，但真正具有较高漆酶产量的菌株并不多，其漆酶产量还不能满足工业生产所需的酶量，且发酵周期较长（7~14天）。当前用于漆酶生产的菌株主要有：黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、变色栓菌(Trametes versicolor)、彩绒革盖菌(Coriolus hisutus)、杂色云芝(Coriolus versicolor)、血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)以及糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)等，但目前未见竹黄菌(Shiraia bambusicola)产漆酶的研究报道。

竹黄是一种药用真菌，具有很高药用价值和保健功效。竹黄发酵生产漆酶具有发酵周期短和酶活力高的优势，同时发酵过程还可产生高活性的超氧化物歧化酶(SOD)和苝醌色素，开发前景广阔。

发明内容

本发明的目的是，利用竹黄菌株（Shiraiasp.） SUPER-H168，保藏号为CCTCC NO：M 207104，已在ZL200710132510.4公开，通过液态发酵法生产漆酶，通过调整各种培养基成份提高漆酶产量。

本发明的技术方案：一种竹黄菌发酵生产漆酶的方法，

出发菌株为：竹黄菌株（Shiraiasp.） SUPER-H168，保藏号为CCTCC NO：M 207104；

液态发酵培养基组成为：碳源5-50 g/L，氮源5-50 g/L，K₂HPO₄ 2-4 g/L，KH₂PO₄ 2-4 g/L，马铃薯汁200 g/L，用纯水配制；

液态发酵条件为：在发酵罐内装入发酵罐体积60%-70%（v/v）的液态发酵培养基，灭菌冷却后接入竹黄菌，接种量为5%-10%，种龄为10-48小时，起始pH和发酵过程pH均为自然，发酵温度为24-32℃，发酵周期为2-5天；在发酵过程中可以添加表面活性剂，以提高漆酶的产量。

发酵过程中添加的表面活性剂主要有：Tween 20、Tween 40、Tween 60、Tween 80、Triton X-100、TritonX-114、TritonX-116、Triton X-405、TX-4、TX-6、TX-9、TX-10、AEO-3、AEO-7、AEO-9、一乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺。最终发酵液中漆酶活力最高可达500 U/mL。

所述的竹黄菌菌株，能够同时发酵产漆酶、超氧化物歧化酶SOD和苝醌色素。

所述的竹黄菌发酵生产漆酶的方法，可利用的产漆酶碳源为葡萄糖、果糖、可溶淀粉、麦芽糖、木糖、蔗糖、乳糖、或半乳糖。