[发明专利]柠檬苦素的制备方法及组合物和其应用

说明书

技术领域

本发明属于植物药(中草药)领域，具体而言，本发明涉及一种高纯度的柠檬苦素的制备方法，以及以其制备出的高安全性的含高纯度柠檬苦素的药物组合物。另外，本发明还涉及上述药物组合物在制备用于预防和/或治疗结肠癌或直肠癌的药物中的应用。 

背景技术

柠檬苦素(limomin)，又称吴萸苦素、白藓内酯、黄柏内酯，主要存在于芸香科(Rutaceae)和楝科(Meliaceae)植物中，如枳实(脐橙、柑桔、香橙)柚等中，以果核(种子)中含量较高，果皮中含量较少(约万分之一至十万分之五)。柠檬苦素的化学结构如下所示： 

柠檬苦素具有抗癌、镇痛、抗炎、降低胆固醇、抑制HIV-1病毒、催眠、抗焦虑、镇静和增加食欲改善消化功能等作用，还有杀虫作用，有明显抗疟(原虫)作用。 

当前，柠檬苦素的制备方法已经有现有文献报道了，但是要么制备中浪费溶剂、提取率低，造成生产成本高；要么制备出的组合物(产物)纯度低，带有较多杂质，直接使用为用药安全带来极大隐患，而且也难以通过审批从而用于实际产业化，而进一步提纯则相当于增加制备成本。 

具体而言，中国专利申请第00106285号公开了从芸香科果实中提取柠檬苦素的方法，然而该方法制备的柠檬苦素的纯度很低(达不到90％)； 

中国专利申请第00130622号公开了一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺，然而该工艺制备的柠檬苦素的纯度很低，我们研究发现，要得到高纯度产物需要在过硅胶色谱柱 后频繁采用重结晶步骤(远大于2次)才行，提取率低而且成本很高； 

中国专利申请第02145371号公开了柠檬苦素制备治疗痔疮药物的用途，其安全性是口服标准，比本发明的产物能用于安全注射的标准低得多； 

中国专利申请第03118175号公开了一种从柚子中同时提取果胶、柚皮甙等八种产物的方法，然而该方法在通过吸附树脂脱苦的时候将损失大量柠檬苦素，造成柠檬苦素的提取率低，另外三次用柱分离，造成工艺复杂，不适合工业化； 

中国专利申请第03140079号公开了一种柠檬苦素化合物-木果楝内酯及其用途，其涉及新的化合物； 

中国专利申请第200780038818号公开了用于激活PLTP基因表达的方法和组合物，其包括施用有效量的柠檬苦素类化合物，该方法和组合物用于治疗肥胖； 

中国专利申请第200810037312号公开了一种工业层析法制备柠檬苦素单体的工艺，该文献将工业层析柱用在结晶后与重结晶前，柠檬苦素损失较大，而且我们研究发现，虽然该文献声称(而且没有提供依据证明)产物中的柠檬苦素纯度大于98％、99％，但是我们重复了其实施例，发现纯度最好也不超过93％，达不到注射用的安全纯度，如要提高纯度，需要再增加多次重结晶过程； 

中国专利申请第200810046164号公开了从吴茱萸中分离柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，然而其中需要用到高效制备液相分离，不适用工业生产(或者工业生产成本极高)，只适合实验室制备； 

中国专利申请第200810204440号公开了一种从柚核中提取柠檬苦素的工艺，然而该工艺所得的产物纯度不超过92％； 

赵雪梅等在“柑橘属中柠檬素类化合物研究进展”一文中提到柠檬苦素的提取制备，采用己烷脱脂、二氯甲烷提取，最后采用二氯甲烷多次重结晶得到柠檬苦素。该方法采用昂贵的己烷进行脱脂，成本高，而且提取率也低。 

为了克服现有技术的不足，本发明人经过长期艰苦研究，发现采用有机酸提取的效率比传统的乙醇提取效率更高，而且采用有机酸提取-大孔树脂纯化-活性炭纯化这三个步骤的依次组合就能够在只需要两次重结晶纯化的情况下得到纯度大于98％的柠檬苦素，生产成本低且产率高，而且最后的结晶纯化无需氯仿等有毒物质。 

另外，当前中药提取物的安全性问题，尤其是注射液安全性问题日益为广大群众和政府管理部门所重视，例如双黄莲注射液、清开灵注射液都由于制备残留的杂质而发生了严重的不良反应，为此本发明人特别研究了本发明制备方法所得产物并进行了艰苦的动物实验，令 人意外的是，其中的这些杂质即使在注射给药时也没有引起不良反应，而且也没有干扰柠檬苦素药效的发挥，能够有效地预防和治疗直、结肠癌，也可以用于直、结肠癌的辅助用药。 

发明内容