[发明专利]一种能抗重茬障碍的复合微生物制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于抗重茬障碍的复合微生物制剂，其特征在于，所述复合微生物制剂包括植物乳杆菌、巨大芽孢杆菌、酿洒酵母菌、白色链霉菌、沼泽红假单胞菌，并由上述菌组分通过厌氧和好氧相结合的发酵工艺复合培养而成。

2.如权利要求1所述的复合微生物制剂，其特征在于：所述各菌组分的重量百分比为：植物乳杆菌为15～35％；巨大芽孢杆菌为5～25％；酿酒酵母菌为10～30％；白色链霉菌为15～30％；沼泽红假单胞菌10～25％。

3.如权利要求2所述的复合微生物制剂，其特征在于：所述各菌组分的重量百分比为：植物乳杆菌为20～30％；巨大芽孢杆菌为10～20％；酿酒酵母菌为15～25％；白色链霉菌为15～25％；沼泽红假单胞菌15～25％。

4.如权利要求3所述的复合微生物制剂，其特征在于：所述各菌组分的重量百分比为：植物乳杆菌为30％；巨大芽孢杆菌为15％；酿酒酵母菌为20％；白色链霉菌为20％；沼泽红假单胞菌15％。

5.如权利要求3所述的复合微生物制剂，其特征在于：所述各菌组分的重量百分比为：植物乳杆菌为25％；大芽孢杆菌为10％；酿酒酵母菌为20％；白色链霉菌为25％；沼泽红假单胞菌20％。

6.如权利要求3所述的复合微生物制剂，其特征在于：所述各菌株组分的重量百分比为：植物乳杆菌为20％；巨大芽孢杆菌为20％；酿酒酵母菌为20％；白色链霉菌为20％；沼泽红假单胞菌20％。

7.如权利要求1至6之一所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述复合微生物制剂的总菌数≥2×10⁸个/ml，PH值为3.5～4.0。

8.一种制造如权利要求1至6之一所述的用于抗重茬障碍的复合微生物制剂的方法，包括如下步骤：

(1)将植物乳杆菌、巨大芽孢杆菌、酿酒酵母菌、白色链霉菌、沼泽红假单胞菌在各自培养基中进行单菌培养的步骤；

(2)将植物乳杆菌、巨大芽孢杆菌、酿酒酵母菌、白色链霉菌在加有糖蜜的各自培养基中进行驯化培养，将沼泽红假单胞菌在其加有糖蜜的培养基中加入酿酒酵母菌进行复合驯化培养的步骤；

(3)将驯化好的上述菌株液体种子混合，进行复合培养的步骤。

9.如权利要求8所述的制造复合微生物制剂的方法，其特征在于：步骤(1)中植物乳杆菌的单菌株制备中所使用的培养基的组分比例为：酪蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖5g，乳糖5g，乙酸钠5g，柠檬酸二铵2g，Tween801g，K₂HPO₄·3H₂O 2g，MnSO₄·4H₂O 0.05g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，CaCO₃·7H₂O 20g，琼脂15g，蒸馏水1000mL；PH值为6.8；

巨大芽孢杆菌的单菌株制备中所使用的培养基的组分比例为：牛肉膏10g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mLPH值为7.2～7.4；

酿酒酵母菌的单菌株制备中所使用的培养基的组分比例为：NaNO₃ 3g，K₂HPO₄.3H₂O 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，蔗糖30g，琼脂15g，蒸馏水1000mL；

白色链霉菌的单菌株制备中所使用的培养基的组分比例为：NaCl 0.5g，KNO₃1.0g，K₂HPO₄·3H₂O 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，FeSO₄·7H₂O 10mg，可溶性淀粉20g，琼脂20g，水1000mL；PH值为7.2～7.4；

沼泽红假单胞菌的单菌株制备中所使用的培养基的组分比例为：蛋白胨3g，酵母膏3g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，CaCl₂ 0.3g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，PH值为6.8。

10.如权利要求9所述的制造复合微生物制剂的方法，其特征在于：步骤(2)中植物乳杆菌的驯化培养中所使用的培养基的组分比例为：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖5g，乳糖5g，乙酸钠5g，柠檬酸二铵2g，Tween80 1g，K₂HPO₄·3H₂O 2g，MnSO₄·4H₂O 0.05g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，CaCO₃·7H₂O 20g，蒸馏水1000mL；在所述培养基中加入糖蜜调pH值至6.8；

巨大芽孢杆菌的驯化培养中所使用的培养基的组分比例为：牛肉膏10g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL；在所述培养基中加入糖蜜调pH值至7.2；

酿酒酵母菌的驯化培养中所使用的培养基的组分比例为：NaNO₃ 33g，K₂HPO₄·3H₂O 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，蔗糖30g，蒸馏水1000mL；在所述培养基中加入糖蜜，PH值自然；

白色链霉菌的驯化培养中所使用的培养基的组分比例为：NaCl 0.5g，KNO₃1.0g，K₂HPO₄·3H₂O 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，FeSO₄·7H₂O 10mg，可溶性淀粉20g，水1000mL；在所述培养基中加入糖蜜调PH值至6.8；

沼泽红假单胞菌的驯化培养中所使用的培养基的组分比例为：蛋白胨3g，酵母膏3g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，CaCl₂ 0.3g，蒸馏水1000mL；在所述培养基中加入糖蜜调PH值至6.8，再加入酿酒酵母菌进行复合驯化培养；

在步骤(3)的复合培养中，培养基的组分为经预处理的糖蜜和蛋白胨，其中糖蜜和蛋白胨的重量比例为20∶1，PH值调至6.8，100℃灭菌2小时；快速冷却至40℃后，取上述驯化好的液体种子混合，进行接种，上述驯化好的液体种子与上述糖蜜的比例为1∶1，其中在上述驯化好的液体种子中各菌组分重量比例为：植物乳杆菌为15～35％，巨大芽孢杆菌为5～25％，酿酒酵母菌为10～30％，白色链霉菌为15～30％，沼泽红假单胞菌10～25％；30～35℃，72～120个小时发酵，待PH值降至3.5～4.0时即可。