[发明专利]一种帘蛤科线粒体COI基因扩增引物的筛选方法

权利要求书

1.一种帘蛤科线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是a、登陆美国国立生物技术信息中心，下载帘蛤科贝类的线粒体全序列；b、将下载的序列用BioEdit软件比对分析，确定序列两端保守区域；c、在确定的保守区域用引物设计软件Primer Premier 5设计多对引物并合成；d、提取帘蛤科贝类DNA，然后将合成的引物在相应反应体系下进行PCR扩增；e、进行琼脂糖凝胶电泳检测，筛选出条带单一、扩增效率高的一组鸡尾引物，此组鸡尾引物由一对兼并引物和一对普通引物组成，其正向引物为COIF-VLT：ACA AATCAY AAR GAY ATY GG和COIF-VSA：ACC AAT CAT AAA GAT ATT GG，反向引物为COIR-VP：CCT GTA GGA ATA GCA ATA AT和COIR-VJ：CCW GTW GGR ACA GCA ATAAT。

2.如权利要求1所述的帘蛤科线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的帘蛤科贝类的线粒体全序列为3条，下载于美国国立生物技术信息中心。

3.如权利要求1所述的帘蛤科线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的帘蛤科贝类样品为2003年至2010年从中国南北沿海采集的56种帘蛤科贝类的312个个体。

4.如权利要求1所述的帘蛤科线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的反应条件体系为：100ng模板DNA，0.25U Taq聚合酶，1×PCR缓冲液，0.2mM dNTPs，1.5mM Mgcl₂，引物各1μM。

5.如权利要求1所述的帘蛤科线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的PCR扩增条件为：94℃预变性3min，94℃变性1min，48-52℃退火1min，72℃延伸1min，共35个循环，最后72℃延伸5min。

6.如权利要求1所述的帘蛤科线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的琼脂糖凝胶电泳检测所用的琼脂糖质量百分浓度为1％-1.5％。