[发明专利]一种微囊藻毒素MC-RR快速检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微囊藻毒素MC-RR的快速检测试剂盒及其检测方法，属于生物技术领域。 

背景技术

微囊藻毒素（Microcystin，简称MC）是蓝藻产生的一类天然毒素。而科学家的研究表明，被微囊藻毒素污染的饮用水和水产品，给人类健康带来了巨大威胁。微囊藻是一类卑微的生物，但它们有时会表现出超乎寻常的生命力。不论常规的自来水处理工艺，还是将水煮沸，都难以有效去除微囊藻毒素。研究显示，即使在300摄氏度高温下微囊藻毒素仍然可以保留一部分活性。 

微囊藻毒素在我国存在最普遍，含量相对较多的是MC-LR和MC-RR，其中L、R分别代表亮氨酸、精氨酸。微囊藻毒素MC-RR，是一类具生物活性的单环七肽，其化学结构如式所示： 

  

微囊藻毒素水华的频繁暴发严重威胁着生态安全和人类的饮水安全，对水中微囊藻毒素及时准确的监测非常重要。目前对水体中微囊藻毒素检测技术的研究开发非常活跃，主要有高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）、酶联免疫吸附试验（Emzyme-Linkde Immunosorbent Assay，ELISA）以及蛋白磷酸酶酶抑制试验（Protein Phosphatase Inhibition Assay，PPIA）等。

常规的理化检测方法，特别是液相色谱和质谱分析设备体积庞大、价格昂贵、需要环境条件较高的室内环境、而且还需要专门的技术人员操作、前处理复杂、检测费用昂贵；并且由于微囊藻毒素异构体众多，且性质近似，缺少相应标准品，成为微囊藻毒素大规模筛查的限制条件。而磷酸酶酶抑制试验虽然都能很好地检测出毒素，但是存在灵敏度不高或检测过程繁琐，样品能量小等不足。酶联免疫吸附试验(ELISA)是基于抗原－抗体特异性反应的分析方法，具有检测特异性强、灵敏度高、分析能量大、检测速度快、费用低廉等优点，而且能适应大规模样品的快速筛查和预警监测而被人们所重视和采用。 

酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）是将酶的催化反应与抗原抗体的免疫学反应结合起来的一种检测技术。由于抗原、抗体反应的高度专一性，加之酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，因此能使测定方法达到很高的特异性和灵敏度。ELISA方法作为体外诊断及科学研究的手段，集中了抗原抗体反应的特异性和酶促反应的放大作用，理想的底物显示信号使其结果的判读更为客观、简单和快捷。 

水中微囊藻毒素MC-RR的ELISA快速检测试剂盒还未见有此类专利报道。本发明专利利用ELISA技术建立了检测水中微囊藻毒素MC-RR的快速检测试剂盒及其检测方法。 

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种灵敏度高、特异性强、使用方便、可以快速地检测水中微囊藻毒素MC-RR的ELISA快速检测试剂盒，以及这种试剂盒的检测方法。 

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：用于检测水中微囊藻毒素MC-RR的ELISA试剂盒的组成包括盒体，在盒体内设有微囊藻毒素MC-RR酶标物、微囊藻毒素MC-RR标准品、包被微囊藻毒素MC-RR抗体的酶标板、酶标物稀释试剂、洗涤试剂、显色试剂A、显色试剂B、终止试剂、标本稀释试剂。 

本发明还提供一种水中微囊藻毒素MC-RR的ELISA检测方法。 

本发明试剂盒的检测原理为： 

一种微囊藻毒素MC-RR快速检测试剂盒是直接竞争酶联免疫吸附实验（ELISA）。已知微囊藻毒素MC-RR浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。微囊藻毒素MC-RR标准品和样品中的抗原竞争性地与酶标板上的微囊藻毒素MC-RR抗体结合。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入显色试剂A、B，和酶结合物同时作用，产生颜色，颜色的深浅和样品中微囊藻毒素MC-RR的浓度呈比例关系。

本发明中检测结果分析过程为：用所获得的每个浓度的标准品溶液的吸光度平均值（B）除以第一个标准溶液（O标准）的吸光度值（B_O）再乘以100%，即百分吸光度值。计算公式为： 

百分吸光度值（%）＝（B/B_O）×100%

以微囊藻毒素MC-RR标准品浓度（μg/L）值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。用同样的办法计算样品的百分吸光度值，相对应每一个样品的浓度则可从标准曲线上读出样本中微囊藻毒素MC-RR的含量。