[发明专利]高亲和力抗SEB单克隆抗体FMU-SEB-No.2的轻链和重链可变区

说明书

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种单克隆抗体，特别涉及抗SEB单克隆抗体FMU-SEB-No.2的轻链和重链可变区，包括其氨基酸序列和核苷酸序列。

背景技术

生物威胁及其防御是目前世界各国最重要的国家安全关切问题之一，也是军事医学研究的重要领域之一。生物威胁主要包括生物战争和生物恐怖活动，是指利用生物剂(包括战剂)故意对特定目标人群以及与人类生产生活密切相关的其他生物体(如动物、植物)和设施等发动袭击的行为。因此，生物威胁不仅可以大量杀伤人、畜，而且造成的民众心理恐慌、社会混乱以及经济损失等都是十分巨大的。尽管联合国制定的《禁止生物武器公约》)存在，但并没有有效遏止生物武器研制和发展的势头，一些军事大国不断提高其生物战能力，拥有生物武器的国家和地区进一步增多，国际生物威胁的形势日趋恶化。构成生物威胁的主要元素是生物剂，而生物剂中最主要的是烈性病原体及其毒性产物(毒素)。

B型葡萄球菌肠毒素(Staphylococal enterotoxin B，SEB)毒性大、极少量毒素侵入人或动物机体便会中毒，对人、动物及环境构成极大威胁。1.7μg的SEB就可杀死一个成年人，是被列入联合国《禁止生物武器公约》核查清单的11种生物毒素之一。美军10年来的毒素战剂防治研究规划始终将SEB作为重要的研究对象之一，重点研究SEB损伤治疗性抗体和小分子抑制剂等，但是也仅有多克隆抗体(PcAb)制备的报道，治疗性单克隆抗体(mAb)仍然处于起步研究阶段。

抗体单体分子是由两条相同的重链(H链)和两条相同的轻链(L链)，通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。H链和L链包括氨基(N)端和羧基(C)端，靠近N端的可变区(V区)由高变区/互补决定区(HVR/CDR)和骨架区(FR)组成；靠近C端为恒定区(C区)。重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)形成的蛋白质折叠是抗原结合部位，其中的CDR/HVR是抗体与抗原决定基互补结合的部位，C区引发抗原抗体识别后的反应。抗体根据FR/C区不同可分为人源、鼠源等，鼠源性抗体在人体内使用时具有免疫原性，易引起人体的免疫反应，这些免疫反应可引起对鼠源性抗体的清除以及免疫复合物介导的超敏反应。为了克服鼠源性抗体的缺陷，需要构建高亲和力的特异性嵌合抗体、单链抗体或人源化抗体。

在改造过程中，最为重要的是首先必须获得具有良好特异性、亲和力和中和活性的鼠源性亲本抗体，克隆其轻链和重链可变区基因，然后将这两条基因进行改造，构建重组抗体基因。因此，筛选出高亲和力、具有中和活性的鼠源性抗SEB mAb，从中克隆出轻、重链可变区基因，对进一步研制具有完全自主知识产权的紧急救治SEB毒素中毒的中和性基因工程抗体制剂，作为战略储备以填补我国、我军在该领域的空白，对于提升我军未来反生物战、反生物恐怖应对能力，不仅具有极其重大的军事意义，而且在平时食物中毒救治方面也具有十分重要的实际应用价值。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种高亲和力抗SEB单克隆抗体FMU-SEB-No.2的轻链和重链可变区，包括其氨基酸和核苷酸序列，为构建高亲和力、具有中和活性的抗SEB嵌合或人源化基因工程抗体提供支持。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种抗SEB单克隆抗体FMU-SEB-No.2的轻链和重链可变区，所述轻链可变区的3个互补决定区(CDR)序列分别为：

CDR1：Ser-Ser-Val-Ser-Tyr；

CDR2：Asp-Thr-Ser；

CDR3：Gln-Gln-Trp-Ser-Gly-Asn-Pro-Pro-Met-Tyr-Thr；

所述重链可变区的3个互补决定区(CDR)序列分别为：

CDR1：Gly-Phe-Ala-Phe-Ser-Asn-Tyr-Asp；

CDR2：Ile-Ser-Ser-Gly-Gly-Thr-Tyr-Ala；

CDR3：Thr-Ser-His-Asp-Tyr-Gly-Ser-Thr-Tyr-Arg-Trp-Tyr-Phe-Asp-Val。

所述的抗SEB单克隆抗体FMU-SEB-No.2的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1，重链可变区的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。

所述的编码SEB单克隆抗体FMU-SEB-No.2轻链可变区的基因序列如SEQ.ID.NO.3所示，编码重链可变区的基因序列如SEQ.ID.NO.4所示。

所述的抗SEB单克隆抗体FMU-SEB-No.2的轻链和重链可变区应用于构建针对SEB的基因工程抗体或诊断试剂的制备。