[发明专利]一种从杨梅枝叶中提取杨梅素的方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然产物分离技术领域，尤其是涉及一种从杨梅枝叶中提取杨梅素的方法。

背景技术：

杨梅素，黄酮醇类天然化合物，为3，5，7，3’，4’，5’-六羟基黄酮，黄色针状晶体，熔点为324.0～325.5℃，溶于热甲醇，乙醇，不溶于丙酮，25℃水中溶解度为4％，热水中溶解度更大，难溶于氯仿、石油醚，置于空气中易氧化变绿。

杨梅素具有降血糖作用：国外研究发现杨梅素对多种动物模型均具有较好的降血糖作用，可望开发出降血糖药物或者作为糖尿病患者食品添加剂使用。血小板活化因子(PAF)拮抗作用：国外体外研究表明，高浓度杨梅素可通过增加白细胞对低密度脂蛋白胆固醇的清除作用，调节其在血液中的浓度，具抗血栓、抗心肌缺血、改善微循环等多方面的心血管药理作用，有望将其开发为活血化瘀类药物。抗氧化作用：杨梅素是环氧化酶1，环氧化酶2，5-脂氧化酶抑制剂，具有极强的自由基清除能力，可作为天然抗氧化剂应用于食品的保鲜以及保健品、化妆品的储存。保肝护肝作用：杨梅素能明显降低四氯化碳、D2半乳糖胺和异硫氰酸萘酯致小鼠急性肝损伤模型血清中ALT、AST活性和T2BIL含量，减轻肝组织的变性和坏死，并提高单核巨噬细胞吞噬功能和溶血素含量，有望开发为保肝护肝类药物。抗菌消炎作用：杨梅素在体外可抑制和杀灭多种耐药细菌的生长，厌氧菌对杨梅素有高度敏感性，可望开发为抗菌消炎类药物。基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂：未来心血管疾病和肿瘤发生的预防与治疗试剂，具有染色作用且不易褪色。以上研究显示，杨梅素在制备降血糖、抗血栓和抗氧化的药物和保健品中具有广泛的前景。

文献“高速逆流色谱纯化杨梅素(张友胜)”，该文献研究的方法是将经过大孔树脂吸附纯化得到的二氢杨梅素粗品(纯度为82.89％)采用HSCCC方法，对两相溶剂系统、分离条件等进行了优化，可以得到99％以上的二氢杨梅素纯品，该研究结果显示，HSCCC技术在分离中药有效成分方面可以得到纯度较高的产品。杨梅素在大然植物中含量很少，目前主要由二氢杨梅素转化得到，如专利(申请号：申请号：200610019693.4)“一种杨梅素的制备方法”，该专利公开的方法是从藤茶及其它葡萄科蛇葡萄属植物中用水或乙醇-水煎煮提取或回流提取，提取一次或多次，趁热过滤，合并提取液后，加入碱性助剂(如碳酸氢钠、碳酸钠、山梨酸钠等弱碱性物质)，使提取液pH在7～9之间，经加热煮沸进行结构转化、浓缩、析晶过程，再经乙醇-水重结晶，得杨梅素晶体，但转化条件难以控制，因此提供一种从杨梅枝叶中提取杨梅素的方法也是有必要的。

发明内容：

本发明的目的是为了弥补在天然界植物中杨梅素含量少，提取率低，纯度不高，而提供一种从杨梅枝叶中提取杨梅素的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种从杨梅枝叶中提取杨梅素的方法，其特征在于包含以下步骤：

1)酶解：把杨梅枝叶粉碎至10～60目，加入酶及酸水(pH为4～6)使完全浸润，自然酶解5～7天，过滤得酶解物；

2)提取：上述酶解物用95％乙醇溶液超声提取1～2h，提取2-3次，过滤，滤液减压除去有机溶剂，石油醚脱脂得到粗提品；

3)结晶：将上述杨梅素粗提物加水回流溶解，自然冷却，结晶，滤出结晶再加水回流结晶2～3次；

4)高速逆流色谱分离纯化：以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-0.5mol/L盐酸为两相溶剂系统，将上述结晶物用下相溶解，以上相为固定相，下相为流动相，流出物减压蒸干即得杨梅素产品。

所述步骤1)中使用的酶可选纤维素酶、β葡聚酶、苦杏仁酶和淀粉酶中的一种或多种，本发明优选β葡聚酶，酶用量为0.4％～1％。

所述步骤2)中超声波功率0.5～10kw，使用的酸可选盐酸、硫酸、乙酸和磷酸中的一种。

所述步骤4)中使用的两相溶剂为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-0.5mol/L盐酸(3∶10～20∶7～10∶9～15)，色谱仪转速为700～1000r/min，流动相的流速为1～3ml/min。

综上所述本发明的优点是：

1)杨梅枝叶原料易得。

2)酶解，条件温和，不会破坏苷元结构，减少了副反应发生。

3)HSCCC分离效果好，溶剂用量小，无需使用载体，减少了过程中的损失。

具体实施方式：

实施例1：