[发明专利]一种无纺布/聚酯类纤维培养细胞用载体及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种无纺布/聚酯类纤维培养细胞用载体及使用其进行细胞培养的工艺和方法。

背景技术

细胞载体培养是一种可以大规模培养贴壁细胞的技术和方法，是当前贴壁依赖型细胞大规模培养的主要方法。通过对细胞没有毒副作用的载体介质，细胞贴附于载体表面或内部，可以大大提高细胞培养面积和效率，比如微载体培养技术，具有均相培养兼具平板培养和悬浮培养的优势，培养条件(温度、pH值、二氧化碳浓度等)容易控制，并且培养过程系统化、自动化，不易被污染。但是，目前市面上的细胞载体(例如cytodex系列微载体)大多价格昂贵，不适于工业化大规模培养细胞。

经对现有技术文献的检索发现，M.Pohl scheidt等人在《Vaccine》Volume 26，Issue 12，17March 2008，Pages 1552-1565上发表的“Development and optimisation of a procedure for the production of Parapoxvirus ovis by large-scale microcarrier cell culture in a non-animal，non-human and non-plant-derived medium”(“非动物/人/植物源培养液大规模微载体细胞培养生产Parapoxvirus ovis的过程发展和优化”)中，报道了使用Cytodex-微载体进行了50L牛肾细胞BK KL3A株反应器悬浮培养，并且对工业大规模工程放大做了基础研究，而这种大规模的细胞培养和重复性的生产活动需耗费大量的微载体，目前常用的商品化微载体有cytodex系列、biosilon系列、solo微载体等，这些微载体对用于细胞培养来说，价格往往过于昂贵，用于大规模生产成本大，不适合进行工业化生产；同时，作为成型商品，这些细胞载体的形状和大小已经固定，不易加以改动，影响了相应工艺的设计、改进和优化。

发明内容

为了克服上述现有常见细胞载体的缺陷，发明人经过研究开发，提供了利用一种价格低、易于切割加工的无纺布/聚酯类纤维作为细胞培养载体，在细胞培养系统中实施贴壁细胞载体培养，有利于降低工业化大规模贴壁细胞载体培养的成本。

本发明使用的细胞贴壁生长载体，是一种无纺布/聚酯类纤维。无纺布(英文名：Non Woven)又称不织布。是由定向的或随机的纤维而构成，它是一种不需要纺纱织布而形成的织物，只是将纺织短纤维或者长丝进行定向或随机撑列，形成纤网结构，然后采用机械、热粘或化学等方法加固而成。因具有布的外观和某些性能而称其为布。无纺布是新一代环保材料，具有防潮、透气、柔韧、质轻、不助燃、容易分解、无毒无刺激性、色彩丰富、价格低廉、可循环再用等特点。制作无纺布的纤维材料主要有聚丙烯或者聚酯纤维等。其中，聚酯纤维由有机二元酸和二元醇缩聚而成的聚酯经纺丝所得的合成纤维。它是以精对苯二甲酸(PTA)或对苯二甲酸二甲酯(DMT)和乙二醇(EG)为原料经酯化或酯交换和缩聚反应而制得的成纤高聚物--聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)，经纺丝和后处理制成的纤维。

本发明即是使用无纺布/聚酯类纤维为材料制作成的各种形状和大小的细胞载体，进行细胞培养制备病毒或生产疫苗的工艺和方法。

本发明包括以下步骤：

1)将无纺布/聚酯类纤维材料用物理或者化学方式进行适当处理(包括进行各种表面处理)，以更利于细胞贴壁或生长或改善材料强度；同时，剪切加工制作成不同形状和大小的、具有一定强度的、用于细胞培养的各种细胞生长载体。

2)在细胞培养系统(包括各种细胞培养瓶、袋、生物反应器等)中，以上述无纺布/聚酯类纤维的加工品(包括切片、碎片、颗粒等)作为载体，用合适的细胞培养液(基)，进行细胞培养。

3)获取细胞生长或代谢数据；或者，收获细胞或细胞产生物。

本发明以无纺布/聚酯类纤维为材料制作成细胞培养载体，进行细胞培养，具有以下优点：

1、拥有较高的细胞培养比表面积，从而可以增加细胞培养体系内的细胞总量。例如，应用于细胞培养滚瓶内部，通过增大单个滚瓶的细胞培养面积，减少滚瓶数量，从而降低劳动强度，并减小细胞感染机率。