[发明专利]一种犊牛体外胚胎生产的方法无效
| 申请号： | 201010287746.7 | 申请日： | 2010-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN101962627A | 公开（公告）日： | 2011-02-02 |
| 发明（设计）人： | 薛建华;吕小青;朱玉林;宣柏华;梁鸿斌;李艳华;曹福存;吴胜权;王彦平;王海浪 | 申请（专利权）人： | 北京奶牛中心 |
| 主分类号： | C12N5/075 | 分类号： | C12N5/075;C12N5/073;A61D19/02 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王加岭;张庆敏 |
| 地址： | 100192 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 犊牛 体外 胚胎 生产 方法 | ||
1.一种犊牛激素超排的方法，其特征在于，选用9-12周龄犊牛，经阴道埋植CIDR，分别在第5d和第6d注射FSH。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在第5d注射FSH，注射剂量为40mg-45mg，间隔12h再注射30mg-35mg，第6d注射FSH，剂量为30mg-35mg，间隔12h再注射同等剂量的FSH。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在第5d间隔12h注射FSH，注射剂量为40mg和30mg，第6d注射剂量为30mg/12h。
4.一种犊牛体外胚胎生产的方法，包括步骤：
1)犊牛激素超排：选用9-12周龄犊牛，经阴道埋植CIDR，分别在第5d和第6d注射FSH，第7d采卵；
2)犊牛卵母细胞体外成熟：将步骤1)中得到的卵母细胞加入到成熟培养液中，在38.5℃，5％CO2，饱和湿度的条件下培养22-24h；
3)将得到的成熟卵母细胞进行体外受精；
4)受精卵在体外发育成胚胎。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1)中在第5d间隔12h注射FSH，注射剂量为40mg-45mg和30mg-35mg，第6d间隔12h注射FSH，剂量为30mg-35mg。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2)中成熟培养液的成分为：TCM199+10mM HEPES+5％FBS+0.5μg/ml FSH+5μg/ml LH+1μg/ml E2+27.5μg/ml丙酮酸钠+100IU/ml青链霉素+100μM半胱胺。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤3)中受精时间为8h。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤4)包括：在38.5℃，5％CO2，饱和湿度的条件下，将受精卵置于前期发育培养液中培养48h，卵裂后移入后期发育培养液中继续培养，间隔2d半量换液一次，胚胎发育第7d、8d统计囊胚数量；
其中，所述CR I aa液为：114.7mM NaCl+3.1mM KCl+26.2mMNaHCO3+10μg/ml苯酚红+1mM谷氨酸+0.4mM丙酮酸钠+5.5mM半乳酸钙+2％EAA+1％NEAA+141mM MgCl26H2O+100IU/ml青链霉素；所述前期发育培养液为：CR I aa液+6mg/ml BSA，后期发育培养液的成分为：CR I aa液+10％FBS。
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