[发明专利]一种人工合成的新型抗血栓多肽衍生物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及多肽衍生物，尤其涉及经人工衍生化并合成的具有抗血栓活性的多肽衍生物。本发明还涉及该多肽衍生物的制备方法以及作为抗血栓剂的应用，属于生物医药领域。 

背景技术

细胞外基质(ECM)是血管壁的主要成分，其降解贯穿于动脉粥样硬化发生发展的整个过程。基质金属蛋白酶(MMPs)是分解细胞外基质的蛋白酶类中最重要的一类，参与了各种病理过程，包括血管再生、肿瘤浸润和转移、炎症反应等。近年来，国外大量文献报道了MMPs与动脉粥样硬化和冠心病的内在联系，并取得了一定的研究成果。 

动脉粥样硬化发病机理复杂，其中动脉粥样硬化斑块破裂并血栓形成是导致心血管疾病发病及死亡的重要原因。 

生理情况下，ECM处于不断产生和降解的动态平衡中，当ECM产生过多或降解过少时，可引起ECM过度堆积，而导致疾病发生。MMPs在此过程中起重要作用，其可降解基底膜和ECM的大多数蛋白质，如胶原、层黏连蛋白、纤维连接蛋白、蛋白多糖和弹性蛋白等。研究表明，ECM合成或降解代谢失衡与许多心血管疾病的发生有关，而MMPs表达活性增强可使ECM合成与降解失衡，两者参与心肌和血管重构及心室扩张，在心血管疾病的发病过程中起重要作用，用外源性基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)及基质金属蛋白酶抑制剂(MMPI)治疗实验性充血性心力衰竭(CHF)后的心室重构、血管成形术后再狭窄等有一定效果。因此，调节MMPs的活性可能是心血管疾病治疗，特别是血栓治疗的一个新方向，对其拮抗剂的进一步研究将促进临床的早日应用。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一种人工合成的具有良好抗血栓活性的新型多肽衍生物BNW，其结构序列为Pyr-Asn-Trp-NHPh。 

根据基质金属蛋白酶抑制剂(MMPI)的设计思路，基于底物的MMPI的设计理论，利用多肽液相合成及多肽衍生化技术，设计完成了新型抗血栓多肽衍生物BNW，其氨基酸序列为Pyr-Asn-Trp-NHPh，分子量为504。 

本发明的目的之二是提供一种具有良好抗血栓活性的新型多肽衍生物BNW的制备方法。 

根据所设计的BNW结构序列，利用多肽液相合成和多肽衍生化技术进行合成。制备从C端到N端逐个进行。先将C末端色氨酸进行衍生化，得到Trp-苯胺·HCl，之后在缩合剂的作用下，逐个连接氨基酸，达到所要合成的肽链长度，最后利用切割液将肽链从树脂上裂解下 来，即得粗品。经HPLC反相柱进行纯化后通过质谱分析确证。 

以上所述的多肽液相合成方法及多肽衍生化技术是本领域的常规并公知的技术。 

电刺激大鼠颈总动脉血栓形成、ADP诱发的小鼠急性肺血栓形成以及小鼠的凝血时间测定等动物实验证明，本发明的多肽衍生物BNW具有较强的抗血栓活性。 

本发明的目的之三是将新型多肽衍生物BNW应用于抗血栓药物的制备中。 

本发明的有益效果在于： 

根据基质金属蛋白酶抑制剂(MMPI)的设计思路，基于底物的MMPI的设计理论，利用多肽液相合成和多肽衍生化技术，设计完成的新型抗血栓多肽衍生物BNW具有结构简单、人工合成方便和良好的抗血栓活性等有益特点，有望成为一种极具应用潜力且安全有效的抗血栓多肽衍生化药物。 

具体实施方式：

下面用实施例来进一步说明本发明的实质性内容。应当指出，这些实施例仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。 

本发明中所出现的缩略语的说明： 

THF    四氢呋喃 

DCC    二环己基酰亚胺 

Boc    叔丁氧羰基 

HOBt   N-羟基苯并三唑 

DMF    二甲基甲酰胺 

DCM    二氯甲烷 

EA     醋酸乙酯 

Pet    石油醚 

C₄H₄O₂ 2-丁炔酸 

Fomc   9-芴甲氧羰基 

HOSU   N-羟基琥珀酰亚胺 

TFA    三氟乙酸 

TIS    三异丙基硅烷 

EDA    乙二胺 

实施例1新型抗血栓多肽衍生物BNW的制备及分离纯化 

按下述序列制备BNW。 

BNW的结构序列为：Pyr-Asn-Trp-NHPh。