[发明专利]一种具有免疫活性的浒苔多糖及其制备方法

权利要求书

1.一种具有免疫活性的浒苔多糖，其特征在于是指多糖HT-II，为白色絮状物，易溶于水和二甲基亚砜，相对分子量为96kDa，它主要由葡萄糖和甘露糖组成，其组成比为：鼠李糖∶木糖∶甘露糖∶葡萄糖＝36∶20∶6∶28。

2.用于权利要求1所述的一种具有免疫活性的浒苔多糖的制备方法，其特征在于该制备方法为：打碎→90℃水提→过滤→合并提取液→浓缩→乙醇沉淀→去除蛋白→分离纯化→冷冻干燥→多糖纯品。

3.如权利要求1或2所述的一种具有免疫活性的浒苔多糖的制备方法，其特征在于是多糖HT-II的提取纯化方法，其步骤如下：

a、提取：从青岛海域采取缘管浒苔做样品，浒苔样品用自来水冲洗，自然风干后取100g，打碎，以浒苔渣与水的质量比为1∶30加入蒸馏水，95℃提取2h，抽滤，滤渣再以1∶15的蒸馏水重复提取两次，合并滤液，旋转蒸发浓缩至液体微黏，加入3倍体积的95％乙醇，4℃静置过夜。9000rpm离心，沉淀依次用85％、95％、无水乙醇及乙醚脱水，冷冻干燥得粗多糖；

b、脱蛋白：将粗多糖配成5％的糖溶液，用木瓜蛋白酶，按酶与粗多糖质量比为1∶50取蛋白酶加入至糖液中，边加边搅拌，50℃保温6h，9000rpm离心去除沉淀，上清液按糖液总体积的1/4加入Sevage试剂(正丁醇∶氯仿＝1∶4)，摇床充分震荡30min，静置，离心，取上清重复操作，直至无游离蛋白为止；

c、纯化：将粗多糖溶于pH7.4磷酸缓冲液中，上DEAE-Sephadex A-50层析柱(40×2.5cm)进行初步分离。室温下，以上限为0.5mol/L NaCl磷酸缓冲液进行梯度洗脱，流速24ml/h，自动部分收集洗脱液，每10min收集1管(每管约4ml)，采用苯酚-硫酸显色法，于490nm处测定吸光值，检测多糖含量，合并峰位洗脱液，透析后减压浓缩，冷冻干燥，获得的样品再由Sephadex G-100层析柱(100×2cm)进一步纯化，洗脱液为0.05mol/L NH₄AC溶液，流速为8ml/h，以苯酚-硫酸法跟踪检测，合并峰部的洗脱液，透析后浓缩冻干得纯化的浒苔多糖HT-II，采用紫外分光光度法，在260nm、280nm处检测样品的吸光值，确定其纯度。

4.如权利要求1或2或3所述的一种具有免疫活性的浒苔多糖及其制备方法，其特征在于所述的浒苔多糖HT-II可单独或协同ConA使用，能够有效促进小鼠脾淋巴细胞增殖，提高小鼠细胞白介素II的分泌。