[发明专利]一种对水产动物有免疫增强活性的CpG寡聚核苷酸及其制备和应用

权利要求书

1.一种对水产动物有免疫增强活性的CpG寡聚核苷酸，其特征在于：对水产动物有免疫增强活性的CpG寡聚核苷酸序列具有序列表SEQ ID N0.1所示的碱基序列。

2.一种按权利要求1所述的对水产动物有免疫增强活性的CpG寡聚核苷酸的制备方法，其特征在于：将人工设计合成的CpG寡聚核苷酸序列与pUC57质粒相连，而后转化入大肠杆菌DH5α菌株中，37℃，200-220rpm震荡培养4-6h；将上述菌液按1∶100的体积比接种与发酵培养基中，发酵培养7-9h；收集富含CpG寡聚核苷酸的发酵培养物于STET缓冲液中悬浮菌体并震荡搅拌，而后在每毫升菌体重悬液中加入80-100μg搅拌均匀于36.5-37.5℃中水浴20-30min，随后将裂解液于沸水浴中加热10-15min，沸水加热后冷却至室温，离心取上清；将上清加入到上清液0.6倍体积的预冷的异丙醇中，室温下沉降离心沉淀，即得具有序列表SEQ ID NO.1所示的碱基序列的寡聚核苷酸CpG ODNs。

3.按权利要求2所述的对水产动物有免疫增强活性的CpG寡聚核苷酸的制备方法，其特征在于：所述发酵培养基的组成成分：5g/L胰化蛋白胨，5g/L酵母提取物，4g/L KH₂PO₄，4g/L K₂HPO₄，7g/L Na₂HPO₄，1.2g/L(NH₄)₂SO₄，0.2g/L NH₄Cl，加氨苄青霉素至50μg/ml；发酵过程中的补加培养基成分：71g/L酵母提取物，71g/L蛋白胨，170g/L甘油，5.7g/L MgSO₄；

所述STET缓冲液成分：80g/L蔗糖，2.0％(φ)TritonX-100，100mmol/L EDTA，50mmol/L Tris-Cl，pH8.5。

4.一种按权利要求1所述的水产动物有免疫增强活性的CpG寡聚核苷酸的应用，其特征在于：所述序列表SEQ ID NO.1所示的碱基序列CpG寡聚核苷酸可作为水产养殖饲料的添加剂或免疫增强剂。

5.按权利要求4所述的具有免疫增强活性的CpG寡聚核苷酸的应用，其特征在于：将上述序列表SEQ ID NO.1所示的碱基序列CpG寡聚核苷酸加入到饲料中，每千克饲料中添加10-100mg上述序列表SEQ ID NO.1所示的碱基序列的CpG ODNs寡聚核苷酸。