[发明专利]一种干扰素发酵液的制备方法

权利要求书

1.一种干扰素发酵液的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

(1)用YPD液体培养基作为种子培养基，28～30℃有氧条件下摇床培养毕赤酵母菌20～24h，成为一级种子；

(2)将一级种子液接种于YPD液体培养基二级种子培养基中培养，28～30℃有氧条件下培养毕赤酵母菌20～24h，成为二级种子；

(3)发酵罐实消，进行发酵扩大培养：首先将发酵罐的pH电极和溶氧电极进行标定，然后加入发酵培养基、甘油，最后121℃30min高压灭菌，灭菌结束后，培养基温度降至28℃时，用种子流加管接种，确保无菌操作，同时记录发酵罐参数，在28～30℃有氧条件下，采用流加补料发酵方式培养90～120h；

(4)发酵结束后，将发酵液经5000rpm 15min离心，上清液即为重组酵母菌经过诱导表达的干扰素发酵液，然后将发酵液进行脱盐、浓缩、无菌过滤处理，即可得到干扰素原液；菌体沉淀用白色淀维粉吸附，在干燥箱中40℃烘干成干粉。

2.根据权利要求1所述的一种干扰素发酵液的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中种子培养时间为24h，培养温度28℃。

3.根据权利要求1所述的一种干扰素发酵液的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中YPD液体培养基含有：1％蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.5％NaCl。

4.根据权利要求1所述的一种干扰素发酵液的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中种子培养时间为24h，培养温度28℃。

5.根据权利要求1所述的一种干扰素发酵液的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中发酵培养基：在1000ml水中，加入10ml(1％)的黄豆饼浸出汁，10g葡萄糖，3g蛋白胨，2.5gNaCl，2gCaCO3。

6.根据权利要求1所述的一种干扰素发酵液的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中发酵培养时间为110h，发酵培养基、甘油、种子的添加比例为50∶3∶5。

7.根据权利要求1所述的一种干扰素发酵液的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中脱盐处理是用0.01mol/L的磷酸缓冲液(pH7.5-8.0)。

8.根据权利要求1所述的一种干扰素发酵液的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中所述干粉以1∶5比例拌料使用。