[发明专利]一种利用颠茄外植体诱导胚性细胞的方法

权利要求书

1.一种利用颠茄外植体诱导胚性细胞的方法，特征在于附加2,4-D 3.0mg/L的MS固体培养基MSA诱导胚性细胞，胚性细胞在以附加2,4-D 2.0mg/L的MS固体培养基MSB上筛选、继代培养，其过程包括：

（1）在颠茄无菌苗长侧芽诱导胚性细胞，诱导胚性细胞，以附加2,4-D 3.0mg/L的MS固体培养基MSA诱导胚性细胞；

（2）胚性细胞的扩繁继代：将胚性细胞在以附加2,4-D 2.0mg/L的MS固体培养基MSB上筛选、继代培养，在附加2,4-D 2.0mg/L、0.2mg/mL 6-苄氨基嘌呤(6-BA)、2.2g/L KCl、40g/L蔗糖的MS液体培养基LMS上悬浮培养；

（3）胚性细胞诱导植株再生：将胚性细胞在MS培养基上再生完成植株重建。

2.根据权利要求1所述的利用颠茄无菌苗诱导胚性细胞的方法，其特征在于：无菌苗或者继代苗长至5片叶以上时，去除顶芽和叶片，继续培养2天以上，诱导侧芽发生后，在体视显微镜下剥离茎尖，接种于体细胞胚诱导培养基上培养。

3.根据权利要求1所述的利用颠茄无菌苗诱导胚性细胞的方法，其特征在于：所述颠茄胚性细胞要不断进行纯化，其方法是在体视显微镜放大筛选诱导出来的典型胚性细胞，在新的MSB培养基上继代、保存。

4.根据权利要求1所述的利用颠茄无菌苗诱导胚性细胞的方法，其特征在于：所述步骤（3）中的利用胚性细胞悬浮培养使用较高浓度的KCl和蔗糖的液体培养基，即附加2,4-D 2.0mg/L、0.2mg/mL 6-苄氨基嘌呤(6-BA)、2.2g/L KCl、40g/L蔗糖的MS液体培养基。