[发明专利]在抗体微阵列系统中识别异嗜性抗体干扰的方法及应用其检测目标抗原的抗体微阵列芯片

说明书

技术领域

本发明涉及在抗体微阵列系统中识别异嗜性抗体干扰的方法及应用其检测目标抗原的抗体微阵列芯片。 

背景技术

分析病人血清中的多种蛋白质从而指导诊断、治疗和预后，促进了蛋白质并行分析方法的发展(Expert Rev Mol Diag 2007；7：87-98.)。这种多种蛋白并行分析的方法称为蛋白质芯片，蛋白质微阵列芯片等。目前的多指标分析方法主要是基于传统的免疫学原理，将抗原或抗体以阵列的形式固定在固相表面，与血清中的相应的靶物质特异性的结合，并与标记的抗体相结合，标志物能够被蛋白质芯片阅读仪拍摄或扫描，计算机软件对扫描或拍摄的结果进行分析，得出各种蛋白质的分析结果。多指标分析的方法可以用于早期诊断、鉴别诊断、疾病分期以及预后(Clin chem.56：2，186，2010)。到目前为止主要应用的是抗体微阵列芯片技术。除了蛋白质芯片本身遇到的新的技术挑战，传统的免疫学方法所遭遇的很多技术问题，也必将在蛋白质芯片中体现，如异嗜性抗体的干扰。 

异嗜性抗体存在于血清中，能够与动物来源的免疫球蛋白结合，从而干扰基于双抗体夹心法的免疫学检测(Clin chem.34/1，27-33，1988)。在血清中如果不存在被检测的特异性抗原，而存在这种能够结合动物(尤其是小鼠)免疫球蛋白的抗体，就会导致假阳性的结果(Lancet 1980；ii：1136，clin chem.1986；32：476，1986；32：1491，1987；33：414)。 

目前临床实验室和诊断试剂生产厂商普遍采取了好多措施来警示这种异嗜性抗体的存在，并采用相应的封闭方法。这些方法包括1)采用其他的方法作对照，是否出现结果的差异(clin chem.2000；46：1037，clin chem.；1999；45：942，Ann clin bio 1999；36：704-21)；2)对血清样品进行系列稀释，看信号是否呈现线 形(clin chem.；1999；45：942，Ann clin bio 1999；36：704-21)；3)用特殊的试剂筛选血清中是否存在抗小鼠的抗体(clin chem.；1999；45：942，)，或者用封闭试剂对样品进行预处理(clin chem.2001 47 1332，clin chem.1998 44 1942)。但是以上各种方法不能完全消除异嗜性抗体的影响。如果要对每一分血清进行筛选和封闭，存在工作量翻备，试剂成本提高的问题。并且由于异嗜性抗体干扰的多样化，以及各种产品所使用的抗体不同，目前尚未有一种方法可以有效的消除所有的异嗜性抗体的干扰。 

在抗体微阵列系统中，一个产品中通常含有十几到二十几对单克隆抗体。被异嗜性抗体干扰的几率要比普通的免疫学检测产品要高的多。对每个抗体进行人源化改造是不可行的。对每一份血清在检测前进行预处理工作量会很大，如PEG处理。根据我们通常的经验是在每一份血清中添加阻断剂如HBR或mac33，大部分的样品中的干扰会被消除，但是剩余的一些顽固的样品中的干扰就很难判断是异嗜性抗体干扰还是指标的真阳性，对于一个肿瘤这种致死的疾病来说，肿瘤指标的假阳性所造成的负担应该尽可能的避免。因此需要建立一种对异嗜性抗体识别的有效机制，尽可能的减少假阳性的产生。 

发明内容

本发明的一个目的在于克服上述现有的方法不能完全消除异嗜性抗体的影响或不能有效识别异嗜性抗体的缺陷，提供在抗体微阵列系统中识别异嗜性抗体干扰的方法。 

在抗体微阵列系统中识别异嗜性抗体干扰的方法，包括以下步骤： 

(1)根据检测疾病的类型制备的抗体微阵列芯片的预定组成，对所有需要固相化的抗体进行免疫球蛋白的型和亚型的鉴定； 

(2)根据步骤(1)的鉴定的所有抗体的型和亚型的种类，选择所有抗体的型和亚型的种类相同的多种与固相化抗体、被检测的抗原、酶标抗体不发生交叉反应的单克隆抗体进行组合得到混合物(mixture monoclonal antibodies，简称MMAB)； 

(3)在抗体微阵列芯片的制备过程中，在每一个检测阵列内均设置增加一个用于对照控制的识别异嗜性抗体干扰的识别点，所述识别点中的点样样品为 步骤(2)的混合物；