[发明专利]一种鸭疫里默氏杆菌疫苗生产用培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鸭疫里默氏杆菌疫苗生产用培养基及其制备方法。

背景技术

鸭传染性浆膜炎是发生于家鸭、鹅、火鸡和多种禽类的一种接触性传染病，又称鸭疫里默氏杆菌病、鸭疫巴氏杆菌病、鸭败血症、鸭疫综合症、鸭疫败血症和新鸭病，其病原为鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer，RA)。该病呈急性败血症或慢性感染，临床上主要表现为咳嗽、喘气、下痢、眼鼻分泌物增多、共济失调和头颈震颤，少数慢性病例出现头颈歪斜等症状；典型病变为纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎和干酪性输卵管炎。该病一年四季均可发生，以冬季发病严重，主要经污染的饲料、饮水、飞沫等传播；1-8周龄的鸭高度敏感，尤以2-3周龄的雏鸭发病率较高，可达90％；死亡率受多种因素的影响，差别较大，常为10-20％，但也有的高达60-75％。应激因素如饲养密度过大、通风不畅、卫生条件差、气候突变等，可诱发该病的发生，死亡率大大提高；耐过鸭可表现神经症状，生长发育缓慢、消瘦，饲料报酬下降，严重影响生产成绩，造成严重的经济损失。

鸭传染性浆膜炎是目前对世界各国养鸭业造成危害最为严重的传染病之一，在世界范围内分布，几乎在所有采用集约化养鸭生产的国家都有发现，给世界养鸭业造成了巨大的经济损失。我国是一个养鸭大国，养鸭业在我国的农业经济中占有着重要的地位，也是人们生活所需肉蛋的重要来源之一，鸭传染性浆膜炎在我国各养鸭地区的流行较严重，是我国养鸭场(特别是商品鸭场)最难于对付、造成养鸭业经济损失的最主要传染病之一，加之RA的耐药性逐渐增强，给我国养鸭业造成了巨大经济损失。

由于鸭传染性浆膜炎给养鸭业带来严重的经济损失，有关其免疫预防研究引起了越来越多的关注。尽管RA血清型较多，各型之间基本无交叉保护作用，给疫苗的研制带来了较大的困难，但因疫苗接种是预防鸭疫里默氏菌的有效措施，因此RA疫苗的研究引起了兽用生物制品领域科研人员的广泛关注，目前研究报道的RA疫苗主要有RA灭活疫苗(只有一种血清型的单价灭活疫苗、含多种血清型的多价灭活疫苗)、RA和E.coli二联灭活疫苗、RA弱毒活疫苗、提取获得RA亚单位成分的亚单位疫苗。但目前国内外还没有政府批准生产使用鸭疫里默氏菌疫苗，多是自家场疫苗(即自己小量生产，自己使用)。

不管生产鸭疫里默氏菌疫苗的何种类型的疫苗，其基础均涉及鸭疫里默氏菌的培养，但鸭疫里默氏菌的培养条件要求极高，在普通的细菌培养配方或基质上难以生长，目前鸭疫里默氏菌培养过程中所涉及的培养基质主要有以下几类：第一类是商品化专用培养基，如胰酶大豆肉汤、脑心肉汤等，这类培养基价格较高；第二类是在普通培养基中加入较高比例的动物血或血清(如10％犊牛血清或脱纤羊血的营养肉汤)；第三类是用动物或活胚进行培养。上述三类培养基质中，动物或活胚培养较繁琐、工作量大，且不能用于工厂化的大规模发酵生产；第一类商品化专用培养基和第二类在普通培养基中加入较高比例动物血或血清的方法成本高且目前未有用于工厂化大规模发酵生产的效果报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸭疫里默氏杆菌疫苗生产用的培养基(命名为：N-J合成培养基)，可用于鸭疫里默氏杆菌大规模发酵，并可降低鸭疫里默氏菌疫苗的生产中鸭疫里默氏菌的大规模发酵这一生产环节的成本。

本发明的鸭疫里默氏杆菌疫苗生产专用培养基(N-J合成培养基)极其适合鸭疫里默氏杆菌大规模发酵，包括基础培养基成分及配比、添加物及其预处理方法与比例、培养基的制备程序。

一种鸭疫里默氏杆菌疫苗生产用培养基，包括基础培养基和添加物，所述基础培养基的组分及比例为：胰蛋白胨，1.5-1.9％；酵母提取物，0.2-0.7％；牛肉浸膏，0.2-0.7％；水解乳蛋白，0.2-0.7％；葡萄糖，0.1-0.4％；NaCl，0.5％；磷酸二氢钾，0.1-0.7％；磷酸氢二钾，0.1-0.7％；Na₂HPO₄·12H₂O，0.5-0.9％；(NH₄)₂SO₄，0.1-0.2％；NH₄Cl，0.01-0.03％；其中所述各组分的百分比为重量/体积百分比；所述添加物为采用颈静脉采血或颈动脉放血的方法无菌采取非疫区健壮牛血并无菌脱纤，于-20℃和室温冻融，反复冻融3次后，保存于-20℃备用或采血并无菌脱纤后直接保存于-20℃，使用前取出反复冻融3次。

所述的鸭疫里默氏杆菌疫苗生产用培养基，所述添加物的用量为：裂解血球全血按体积比0.8-1.5％加入基础培养基中。