[发明专利]检测手足口病患者EV71-VP1抗体在预测病情转归中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种滴定手足口患者EV71IgM抗体和EV71IgG抗体滴度的成套试剂及其在预测手足口病患者病情转归中的应用。

背景技术

手足口病重症的病原主要是肠道病毒属71血清型(EV71)，其主要临床表现为神经系统损害、伴有/或心、肺损伤甚至功能衰竭。临床上病情发展往往不可预测，状况尚好患儿可在短时间内发生急转直下的变化，甚至暴死。重症患者给予及时的被动免疫治疗(比如免疫球蛋白、恢复期血清等)可使病情转危为安。但是重症的发生发展少见预兆，临床上也缺乏参考指标，因此临床掌控治疗时机非常困难。

发生重症的原因一般认为有二，一是病原学理论，二是免疫学理论。

病原学理论认为，EV71为小RNA科病毒，其碱基易发生突变、同源重组、甚至丢失、插入等，随时产生病毒突变株，这种随机的变异导致了临床病例轻重不同和组织器官损伤差异的多样性；

免疫学理论认为，肠道病毒属家族庞大、亲缘关系错综复杂，结构蛋白VP1用于血清型别的分类。但型别间VP1存在同源序列，抗原性有交叉，因此机体在感染某种肠道病毒产生的免疫记忆，可被不同血清型的肠道病毒唤醒。如果手足口患者之前曾感染亲缘密切的病毒，那么在感染EV71重症病原时，机体表现出快速有效的免疫应答，细胞免疫迅速活跃、抗体在短时间内升高。

从上述免疫学理论可以看出，即便同是重症病原，感染免疫基础不同的机体可产生不同的临床表现，免疫基础是病情转归的关键因素，提示患儿早期抗体水平与病情转归之间存在相关性。采用ELISA方法检测患者抗体，可为临床判断EV71患儿的转归、预警重症发生、决策治疗方案和掌控治疗时机提供重要的参考依据。

抗体水平多用于评价疫苗免疫效果。近年来在麻疹的大规模的爆发流行中，科学家利用麻疹抗体研究和评价了疫苗免疫策略^[1]，利用抗体水平预测病情的转归规律已在出血热研究中见有报道，MacNeil A^[2]报道病毒特异性IgG、IgM水平预测出血热转归中起着重要的作用等。

1Lee MS，Nokes DJ：Predicting and comparing long-term measles antibody profiles of differentimmunization policies.Bull World Health Organ.2001；79(7)：615-24.

2MacNeil A，Comer JA，：Sin Nombre virus-specific immunoglobulin M and G kinetics in hantaviruspulmonary syndrome and the role played by serologic responses in predicting disease outcome.J InfectDis.2010Jul 15；202(2)：2

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种检测手足口病患者抗体滴度的成套试剂，本发明的成套试剂可用于检测手足口病患者的抗体滴度，检测结果可以作为预测病情转归的判断依据，从而使临床重症可预测、可预防、可控制，减少死亡病例的发生。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种滴定手足口患者EV71IgM抗体和EV71IgG抗体滴度的成套试剂，包括酶标板和检测试剂；其中，所述EV71IgM抗体的酶标板包括聚苯乙烯板，聚苯乙烯板孔内包被有IgM捕获抗体，EV71IgG抗体的酶标板包括聚苯乙烯板，聚苯乙烯板孔内包被有IgM捕获抗体；所述检测试剂为辣根过氧化酶标记的EV71 VP1。

所述酶标板是通过以下方法制备的：鼠抗人IgG抗体、IgM抗体作为捕获抗体，分别以1×10^-5、1×10^-6稀释后分别包被聚苯乙烯板，并用公知方法封闭、洗板，4℃存放；所述稀释液为pH9.6的碳酸盐缓冲液。

所述检测试剂是通过以下方法制备得到的：用基因工程方法克隆表达EV71 VP1(为公知方法，在此不再赘述)，并用公知方法纯化，辣根过氧化酶(HRP)标记，滴定工作浓度(10^-5～10^-7)。