[发明专利]一种提纯鹰嘴豆芽素A的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种提纯鹰嘴豆芽素A的方法。

背景技术：

鹰嘴豆芽素A，又名生原禅宁A，鸡斗黄素A，英文名称为BiochaninA；分子式：C₁₆H₁₂O₅；分子量：284.26；分子结构式如下图，主要存在于红车轴草、鹰嘴豆等豆科草本植物中。

目前对鹰嘴豆芽素A的药理研究主要集中在其抗肿瘤和抗氧化等方面。林长乐等实验发现鹰嘴豆芽素A在其实验设定的浓度下均能减少由HIV-1介导的细胞融合数(EC₅₀＝5.1μmol·L^-1，SI＝39)及p24抗原的表达量(EC＝38μmol·L^-1，SI＝5.2)。终浓度5、10、25、50μmol·L^-1，d BioA对CD4⁺淋巴细胞早期活化抗原CD69表达具有明显抑制作用(P＜0.01)，其中50μmol·L^-1达到最大抑制率，能使活化抑制CD4⁺淋巴细胞早期活化作用。另有报道发现BioA对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期具有明显的抑制作用。

目前有关提取鹰嘴豆芽素A的工艺有：

专利(申请号200410013189.4)“一种从红车轴草制备红车轴草异黄酮的制备工艺”，该发明采用低碳醇热回流提取，再用矿酸作水解处理，浓缩加高温活化硅胶粉或加高温活化的活性氧化铝吸附，过滤浓缩洗脱液，干燥即得红车轴草总异黄酮制备物。该方法柱层析吸附量小，解析率低，且未分离得到各单体异黄酮。

专利(申请号200910229040.2)“鹰嘴豆芽素A的合成方法”，以对甲氧基苯乙腈和间苯三酚作为原料进行缩合，关环，然后经过提纯而获得产物。该方法工艺复杂，得率低，所用原料毒性大，成本高。

目前尚无文献采用超临界萃取法提取纯化鹰嘴豆芽素A。

超临界二氧化碳萃取分离过程的原理是利用超临界二氧化碳对某些特殊天然产物具有特殊溶解作用，利用超临界二氧化碳的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和对超临界二氧化碳溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界二氧化碳与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。当然，对应各压力范围所得到的萃取物不可能是单一的，但可以控制条件得到最佳比例的混合成分，然后借助减压、升温的方法使超临界流体变成普通气体，被萃取物质则完全或基本析出，从而达到分离提纯的目的。是现有比较环保的提取方法。

发明内容：

本发明的目的在于克服鹰嘴豆芽素A现有制备技术中存在的缺陷，提供了一种提纯鹰嘴豆芽素A的方法。该方法包括如下步骤：

(1)将原料粉碎至50-100目，用pH4-6的酸水拌湿，加入生物酶于35-40℃保温酶解，得酶解物料；

(2)将酶解物料加乙醇热回流提取，提取2-3次，提取液回收乙醇，得粗提物；

(3)将粗提物投入到超临界CO₂萃取釜中，再注入夹带剂，通入CO₂，在萃取压力为20-55MPa，温度为30-55℃条件下进行萃取，经过1-2小时萃取后，收集萃取物，挥干溶剂，得粗提物。

(4)将萃取所得粗提物用无水乙醇溶解，再与100-200目的聚酰胺混合拌样，挥干乙醇，得上样样品，装入预处理好的聚酰胺柱层析，用石油醚-乙酸乙酯(10∶1、9∶1、4∶1)梯度洗脱，TLC检测，收集鹰嘴豆芽素A流分，浓缩结晶，再以丙酮重结晶，得白色结晶粉末，即鹰嘴豆芽素A。

其特征在于步骤(1)所述原料为红车轴草全草、鹰嘴豆种子或其常规发芽得到的豆芽。

步骤(1)所述酸水溶液可选盐酸或硫酸；所述生物酶为β-葡聚糖苷酶，酶添加量为1-5‰。

步骤(2)所述乙醇的体积百分比浓度为50-90％，加入量为酶解物料质量的5-10倍。

步骤(3)所述夹带剂为乙醇、甲醇或丙酮。

步骤(4)所述洗脱条件：洗脱体积为4-8倍柱体积。

本发明具有如下优点：操作简单，省时，产品得率高，质量好，纯度高。

具体实施方式：

实施例1：