[发明专利]醉鱼草苷IV的制备方法及其产品和应用

说明书

技术领域

本发明涉及中草药中活性成分的提取方法，具体涉及细风轮菜中活性成分醉鱼草苷Ⅳ的制备方法及其产品和应用。

背景技术

肝纤维化是慢性肝损伤向肝硬化发展的动态过程，表现为细胞外基质(ECM)大量合成、分泌，而降解绝对或相对不足，使ECM在肝脏内弥漫沉积。其起始于肝细胞坏死，随之是炎症反应、纤维生成介质释放、肝星状细胞激活，最终以肝脏结缔组织成分的合成与降解明显失去平衡。各种病因所引起的慢性肝病绝大多数都有肝纤维化，其中25％～40％最终发展为肝硬化甚至肝癌。目前认为导致肝硬化的肝纤维化过程是可以被阻断和逆转的，因此在治疗慢性肝病的同时，积极治疗肝纤维化是防止肝硬化发生的重要治疗措施，不仅能减轻肝脏损害程度，而且能防止肝硬化的发生。近几十年来，人们一直在寻找治疗或预防肝纤维化的药物，并已开发出一些治疗肝纤维化的药物，化学药物有秋水仙碱和氧化苦参碱等；中药有丹参注射液、软肝片等；生物制品有干扰素、促肝细胞生长素等。但这些药物由于副作用或使用效果不佳等原因，未能达到令人满意的治疗效果。因此，研究和开发新型抗肝纤维化的药物十分需要。

细风轮菜(Clinopodium gracile(Benth.)Matsum.)为唇形科风轮菜属植物，别名塔花、瘦风轮、野薄荷等。天然资源丰富，具有清热解毒、活血功效，用于白喉，咽喉肿痛，肠炎，痢疾，乳腺炎，雷公藤中毒，外用治过敏性皮炎等。日本学者对该植物进行了化学成分的研究(Chem.Pharm.Bull.，1993，41(7)：1270-1274)，采用水提取、提取液过大孔树脂柱、先水洗后用50％甲醇洗脱再用纯甲醇洗脱，甲醇洗脱液浓缩成浸膏，浸膏采用制备HPLC的方法，柱子为ODS型号，流动相为乙腈∶水(30∶70～40∶60，梯度洗脱)，从该植物中分离得到醉鱼草苷Ⅳ，得出其分子式为C₄₈H₇₈O₁₈，分子量为942，化学名称为(3β，4α，16β)-13，28-Epoxy-16，23-dihydroxyolean-1-en-3-yl-3-O-{β-D-glucopyranosyl-(1→2)-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)]-β-D-fucopyranoside)}，结构式如下式所示：

但该学者并未对其活性进行研究。

也有韩国学者从国外特有植物(pleurospermum kamtschaticum)中分离得到了醉鱼草苷IV，同时研究了其在抑制NO、PGE2和TNF-α因子方面具有显著抗炎效果，同时其也被发现在醋酸扭体、热板致痛有明显镇痛作用(Bri J Pharm，2006，148(2)：216-225)。此外，该团队也采用poloxamer-407、Triton WR-1339、高胆固醇饮食等作为诱导剂，醉鱼草苷IV具有显著的抑制高胆固醇血症和高脂血症，其效果与普罗布考相当(J Ethno，2007，112(2)：255-261)。但关于醉鱼草苷IV在抗肝纤维化药理活性，对肝纤维细胞的增殖活性干预作用未见报道及专利公开。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种醉鱼草苷Ⅳ的制备方法，该方法得到的产品，以及醉鱼草苷Ⅳ在制备治疗或预防肝纤维化的药中的应用。

本发明所述的醉鱼草苷Ⅳ的制备方法，它是取细风轮菜干药材水提，提取液经大孔树脂柱粗分，水洗后用体积浓度为30％～50％的低碳醇洗脱，再用体积浓度为80％～100％低碳醇洗脱；收集体积浓度为80％～100％低碳醇的洗脱液，浓缩至浸膏，所得浸膏经硅胶、C18柱色谱分离，即得。

上述醉鱼草苷Ⅳ的制备方法，具体包括以下步骤：

1)提取：取细风轮菜干药材，加水煎煮提取1～3次，过滤，合并提取液；

2)吸附洗脱：提取液过大孔树脂柱，水洗至流出液无色，然后用体积浓度为30％～50％的低碳醇洗柱至流出液为浅黄色，再用体积浓度为80％～100％的低碳醇洗柱，收集体积浓度为80％～100％低碳醇的洗脱液A，减压浓缩至浸膏；

3)分离纯化：浸膏用适量甲醇溶解，加硅胶拌匀、烘干，用硅胶干法上柱，洗脱剂洗脱，薄层层析检测，收集洗脱液B；洗脱液B再经C18柱层析，用体积浓度为30％～80％的甲醇洗脱，薄层层析检测，收集洗脱液C；其中，所述的洗脱剂为氯仿∶甲醇∶水的体积比＝6～8∶2～4∶0.5～1的混合溶剂，或者是氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水的体积比＝35～45∶15～25∶30～40∶2～4 的混合溶剂；