[发明专利]抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂板及制备方法

权利要求书

1.抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂板，试剂板水平面自下而上依次为：样品吸收区(1)、金标记蛋白A(SPA)区(2)、固相化抗原、抗体区(3)和吸水区(4)，样品吸收区(1)铺设的为在聚乙烯板及聚氯乙烯衬膜(5)上铺设玻璃纤维膜，且玻璃纤维膜上依次铺设金标探针聚酯膜(7)和硝酸纤维素膜(6)；硝酸纤维素膜(6)上包被检测线(31)和对照线(32)，其中检测线(31)侧贴有金标探针聚酯膜(7)，对照线(32)侧贴有吸水滤纸(8)，其特征在于：检测线(31)包被的是狂犬病毒纯化抗原，包被量为0.1-10μg蛋白；对照线(32)包被的是抗SPA纯化抗体，包被量为0.1-10μg蛋白，金标探针合适SPA标记量为1-10μg/ml。

2.抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂板的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：

(1)狂犬病毒纯化抗原的制备：将狂犬病毒悬液接种到已长成单层的Vero细胞上，35℃培养5～6天后，每隔3天连续收取培养液上清液3次；将收集的病毒悬液浓缩40倍，并加入体积浓度为1/3000的甲醛溶液灭活病毒；将灭活的病毒悬液于5000rpm离心30分钟去沉淀，上清液通过Sepharose 4FF层析柱进行纯化得狂犬病毒纯化抗原；

(2)胶体金标记SPA的方法：分别取半径为5-40nm的胶体金20ml及SPA 50-200μg，在pH6.0-7.0的条件下通过磁力搅拌振荡使其结合，加牛血清白蛋白(BSA)作为稳定剂，且使得BSA最终质量浓度为0.1-5％，采用离心法除去未结合的SPA和未稳定的胶体金颗粒及其凝集物，在离心管底部的深红色沉淀为胶体金-SPA复合物；

(3)将胶体金-SPA复合物喷涂于聚酯膜上：用20ml聚乙二醇洗涤胶体金-SPA复合物，离心除去上清液，得到深红色沉淀，纯化后的沉淀用2ml浓度为2mmol/L，pH6.0-8.0的硼酸缓冲液溶解，用喷涂设备涂于聚酯膜上，冻干；

(4)免疫层析膜的包被：检测线包被的是狂犬病毒纯化抗原，对照线包被的是抗SPA纯化抗体，每条线宽2-5mm，狂犬病毒纯化抗原合适包被量为0.1-10μg蛋白，抗SPA纯化抗体合适包被量为0.1-10μg蛋白；

(5)试剂板装备：用聚乙烯板作为支撑载体，上面依次粘上一层聚氯乙烯衬膜、玻璃纤维组成样品吸收区，再依次铺上吸附了胶体金-SPA复合物的聚酯膜、硝酸纤维膜和吸水滤纸，外面用胶带包封制成。