[发明专利]一种温敏凝胶引导组织再生屏障膜及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种温敏凝胶引导组织再生屏障膜及其制备方法，属于生物医学领域。

背景技术

引导组织再生技术的原理是使用屏障膜隔离周围软组织的长入，隔离周围组织的长入，为牙周组织和骨组织的再生提供空间。屏障膜的性能在一定程度上决定了引导组织再生技术的成败。目前，可吸收性生物膜由于具有生物相容性好，无须二次手术取出等优点，在牙周组织再生和骨缺损的修复中已得到广泛应用。但目前国内外的膜产品存在生产工艺复杂、价格高、不具有骨诱导作用等缺陷。

壳聚糖是甲壳素脱乙酰基的衍生物，具有良好的生物相容性、可降解活性以及促进组织再生活性。以壳聚糖为基材的温敏凝胶系统可以在低温或常温下保持液体状态，当温度升高后发生相转变。由于其相转变条件温和、具有良好的生物相容性等优点，近年来受到广泛关注，已被应用于组织工程、药物载体等领域。当凝胶形成后，由于疏水作用、氢键及共价键等静电作用，使之具有多孔的网状支架形态，并具有一定的机械强度和空间保持能力。因此，利用壳聚糖制备可吸收性生物膜具有广阔的应用前景。

目前，现有技术中，并没有关于利用壳聚糖温敏凝胶制备引导组织再生膜的相关报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种温敏凝胶引导组织再生屏障膜，其生物相容性好，可应用于引导组织再生或引导骨再生领域，本发明还提供了其制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种温敏凝胶引导的组织再生屏障膜的制备方法，步骤如下：

(1)将壳聚糖溶解在浓度能保证壳聚糖充分溶解且溶解后所得溶液pH大于5.0的乙酸溶液中，制得壳聚糖浓度为0.02g/ml的壳聚糖酸溶液，灭菌，于冰浴中放置至少15分钟(防止凝结)，备用；

(2)将β-甘油磷酸钠溶于去离子水，制得浓度为0.35～0.85g/ml的β-甘油磷酸钠溶液，过滤除菌，于冰浴中放置至少15分钟(防止凝结)，备用；

(3)在不断搅拌、冰浴条件下，将壳聚糖酸溶液与β-甘油磷酸钠溶液混合，其中，壳聚糖与β-甘油磷酸钠的质量比为2∶(3.5～8.5)，混合后继续搅拌8～12分钟，得到澄清、均质的壳聚糖/β-甘油磷酸钠溶液，静置1.5～2.5小时，脱泡；

(4)将壳聚糖/β-甘油磷酸钠溶液注入平底容器中，37℃干燥成膜，即得。

所述步骤(1)中，灭菌为：121℃高压蒸汽灭菌10分钟。

所述步骤(2)中，过滤除菌是用0.22μm滤器过滤除菌。

上述制备方法制备的引导组织再生膜，具有多孔结构和良好的生物相容性，其有效成分组成包括壳聚糖和β-甘油磷酸钠，其中，壳聚糖的重量百分比为19.0～36.4％，β-甘油磷酸钠的重量百分比为63.6～81.0％；屏障膜具有多孔的表面和内部结构(可根据β-甘油磷酸钠的重量百分比调节孔径大小)；具有一定的抗拉强度；具有生物降解性能；具有良好的生物相容性。

使用时，将屏障膜植入体内，起到隔离周围软组织的长入、隔离周围组织的长入的功能，为牙周组织和骨组织的再生提供空间。

另外，也可以将步骤(3)制备得到的壳聚糖/β-甘油磷酸钠溶液直接注入体内，在人体体温下，自然成膜。

本发明是利用壳聚糖溶液中加入弱碱性的β-甘油磷酸钠具有温度相转变的特性，在37℃完成脱水后，形成透明略带黄色的生物膜，具有多孔的结构，并表现出了一定的硬度和韧性。

本发明的引导组织再生膜其合成方法简单，成膜条件温和，具有良好的细胞生物相容性，符合生物体内应用的要求，作为一种新型生物膜具有良好的应用前景。

附图说明

图1为红外光谱分析曲线图，其中，曲线a：壳聚糖；曲线b：β-甘油磷酸钠；曲线c：壳聚糖+5％β-甘油磷酸钠(A膜)；曲线d：壳聚糖+10％β-甘油磷酸钠(B膜)。

图2为L929细胞形态示意图，其中，a：处于对数生长期；b：经过胰酶消化后接种；(倒置相差显微镜×10)。

图3为实施例1所制备得到的组织再生膜的形态图，其中，a：正面图；b：侧面图。

图4为实施例1所制备得到的组织再生膜在电镜下的形貌图，其中，a：壳聚糖+5％β-甘油磷酸钠所制备的屏障膜表面形貌；b：壳聚糖+10％β-甘油磷酸钠所制备的屏障膜表面形貌。

具体实施方式

下面结合实验和实施例对本发明作进一步的说明。

实验

1.材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验用细胞株