[发明专利]病人肿瘤组织源性原代细胞分离的多酶体系、其使用方法、用途和相关试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及原代细胞分离技术领域，特别涉及肿瘤组织源性原代细胞分离技术领域，具体是指一种病人肿瘤组织源性原代细胞分离的多酶体系、其使用方法、用途和相关试剂盒。

背景技术

在生物医药行业，尤其是原代细胞培养在药物研发的应用产业，利润空间大，能源消耗小，技术水平高，是中国国家改革与发展委员会确定的政策扶持性行业，已经列入国家改革与发展委员会2010年之前中国重点发展行业指导名录。各省政府等地方政府对该类项目，均列入关键技术、重大项目进行扶持，在人力、财力上享受特别的优惠待遇。

肿瘤组织源性原代细胞指从机体肿瘤组织经特殊技术方法处理后，而获得肿瘤组织源性单个细胞并在体外培养进行，完全正确的模拟机体肿瘤组织生物学功能，这种细胞称为肿瘤组织源性原代细胞。培养第1-10代以内的肿瘤组织源性原代细胞统称为肿瘤组织源性原代细胞培养。

肿瘤组织源性原代细胞的基本生物学特征：

1、与机体肿瘤组织源性细胞生长的生物学特征完全一样。

2、能完全正确的反映肿瘤组织生物学特征。

3、能完全正确的反映机体肿瘤组织对检测实验的结果。

4、能完全正确的反映机体肿瘤组织对药物实验性评估、对药物毒性测试、对药理学分析、对药物治疗性判断。

5、肿瘤组织源性原代细胞生物学特征与肿瘤组织细胞系(或株)有明显地差异性，如细胞遗传学、DNA结构、蛋白质成分等等。

目前，国内外市场上在生物医药行业的药物研发中，细胞水平上研发绝大多数是使用肿瘤细胞系，这类细胞最大缺点是与肿瘤组织源性原代细胞有明显地差异性，不能正确地反应机体组织生物学特征和生理学功能。肿瘤组织源性原代细胞的分离和培养一直是一难点，其原因是细胞消化酶应用问题使分离后的原代细胞不易体外成活。用肿瘤组织源性原代细胞评估药物研发一直是生物医药行业热点和难点。

因此，需要提供一种病人肿瘤组织源性原代细胞分离的试剂，其能高特异地、高灵敏度地分离病人肿瘤组织源性原代细胞，分离的原代细胞可用于对药物实验性评估、对药物毒性测试、对药物治疗性判断。

发明内容

本发明的目的是克服了上述现有技术中的缺点，提供一种病人肿瘤组织源性原代细胞分离的多酶体系、其用途和相关试剂盒，该多酶体系设计合理，能高特异地、高灵敏度地分离病人肿瘤组织源性原代细胞，分离的原代细胞成活率高、纯度高、易于冻存和复苏，可用于对药物实验性评估、对药物毒性测试、对药物治疗性判断，适于大规模推广应用。

为了实现上述目的，在本发明的第一方面，提供了一种病人肿瘤组织源性原代细胞分离的多酶体系，其特点是，包括0.02-0.2％(重量)胶原蛋白酶I-IV(CollagenaseI-IV)、0.001-0.01％(重量)透明质酸酶(Hyaluronidase)、0.01-0.1％(重量)胰蛋白酶(Trypsin)、0.02-0.2％(重量)中性蛋白酶(Neutral Protease)、0.001-0.01％(重量)脱氧核糖核酸酶I(Deoxyribonuclease I)、5-50U/ml弹性蛋白酶(Elastase)。

在本发明的第二方面，提供了一种病人肿瘤组织源性肿瘤原代细胞分离方法，其特点是，采用上述的病人肿瘤组织源性原代细胞分离的多酶体系对病人肿瘤组织源性肿瘤原代细胞进行三步消化处理：

第一步消化：使用0.02-0.2％(重量)胶原蛋白酶I-IV、0.001-0.01％(重量)透明质酸酶；

第二步消化：使用0.01-0.1％(重量)胰蛋白酶、0.02-0.2％(重量)中性蛋白酶；

第三步消化：使用0.001-0.01％(重量)脱氧核糖核酸酶I、5-50U/ml弹性蛋白酶。

在本发明的第三方面，提供了上述的病人肿瘤组织源性原代细胞分离的多酶体系在分离病人肿瘤组织源性原代细胞中的应用。

较佳地，所述病人肿瘤组织源性原代细胞为病人肝癌组织源性原代细胞、肺癌组织源性原代细胞、乳腺癌组织源性原代细胞、前列腺癌组织源性原代细胞。

在本发明的第四方面，提供了一种病人肿瘤组织源性原代细胞分离试剂盒，其特点是，包括装有上述的病人肿瘤组织源性原代细胞分离的多酶体系的试剂容器。

本发明的有益效果在于：

1、本发明提供了一种病人肿瘤组织源性原代细胞分离的多酶体系，包括胶原蛋白酶I-