[发明专利]一种精子细胞膜完整性及活力检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学临床上使用的检测方法，确切地说是一种精子细胞膜完整性及活力检测方法。

背景技术

精子膜完整性与精子代谢、顶体反应、精子获能及精卵融合密切相关，测定精子膜功能可以准确地反映精子功能并预测精子潜在受精能力。自1984年建立精子尾部低渗肿胀试验(HOS)测定人精子膜功能以来，H0S已成为目前不多的几个评价精子膜功能的检测方法之一，越来越广泛地运用于男性生殖避孕的基础研究和不育的临床诊治中。细胞的物质交换和新陈代谢活动依靠细胞膜进行，精子在男、女性生殖道中极易受到各种化学物质影响，精子膜对这些物质的传递能力直接影响精子的活力和新陈代谢，从而关系到能否获能，完成受精的全过程。因此，评价精子膜功能在精子功能检测中具有重要意义。但是，现有的精子尾部低渗肿胀试验仅可显示精子尾膜是否完整，而无法显示精子头膜是否具有完整性，使得人们无法全面地评价精子膜功能，从而也难以准确地检测精子活力。而目前可显示精子头膜完整性的试验方法，由于试验本身存在精子头膜显示不清楚，精子核和顶体不易区分的问题，因此，难以有效地起到鉴别精子头膜是否完整，以及精子头膜破坏的具体部位的作用。

发明内容

本发明的目的，是提供了一种精子细胞膜完整性及活力检测方法，它可解决现上述技术存在的问题，既可确定一个精子的尾部是否完整，又可清楚地鉴别其头部膜是否被破坏。并且，在伊红染液中加入吉姆萨染料对精子染色，可使精子染色程度加重，精子膜显示更加清晰，精子核染色加深，顶体易于区分，从而，更易于鉴别精子膜完整性破坏的部位。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种精子细胞膜完整性及活力检测方法，其步聚如下：

①制备低渗液

低渗液为每100ml蒸馏水中含0.735g柠檬酸钠和1.35g果糖，渗透压是150mOsm的溶液；

②制备伊红-吉姆萨染液

向每100ml的0.9%的生理盐水中加入0.5g伊红和0.1g吉姆萨混匀，使其充分溶解，配置成染液，再用双层滤纸将所述染液过滤，所得滤液即伊红-吉姆萨染液，伊红-吉姆萨染液置于22℃室温内保存备用；

③将0.1ml精液加入1ml步骤①中所述的低渗液中，混匀；

④将盛有步骤③中所述的低渗液和精液的混合溶液的容器置于水温37℃的水中水浴30分钟；

⑤向步骤④所述的混合溶液中加入0.1ml步骤②中所述的伊红-吉姆萨染液，混匀制成精液-HOS-EG混合液；

⑥静置2分钟后取50μl步骤⑤中所述的精液-HOS-EG混合液置于清洁载玻片上，加盖22mm×22mm盖玻片，湿片封片，在显微镜下观察每条精子头部着色和尾部肿胀情况，随机计数200条精子，计算4种类型精子的百分率。

为进一步实现本发明的目的，还可以采用以下技术方案实现：步骤①中所述的蒸馏水是双蒸水。步骤⑥中所述显微镜是光学显微镜，其参数是品牌：Olympus,型号：IX51,产地：Japan，最大放大倍数：400倍。步骤⑥中所述显微镜是高级数码生物显微镜，其参数是品牌：Leica,型号：DM4000B,产地：Germany,最大放大倍数：1000倍。所述吉姆萨是由天青和伊红按1：1重量配制而成。步骤①中所述的低渗液的离子强度为0.15。