[发明专利]检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法及试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及转基因大豆及其深加工产品，具体而言是一种适用于检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法及试剂盒，属于食品安全转基因检测领域。

背景技术：

转基因作物自面世及大规模推广种植以来，就以其自身的优势为人类社会创造了巨大的经济效益。但转基因作物及其加工产品的生物安全性隐患也是一个不可忽视的事实。面对这把双刃剑，世界上许多国家纷纷出台了相应的法律法规来对转基因作物及其加工产品进行标识管理及安全性评价。

1983年人类成功培育了世界上第一种转基因植物——含抗生素药类抗体的烟草。但直到1994年，具有延熟保鲜功能的转基因番茄才成为首例批准进行商业化生产的转基因植物。此后，转基因作物正式走进了大众的视线，在全球得到了大面积推广。1996年全球仅有6个国家种植转基因作物，而到2008年数量激增至25个国家；与此同时，1996年全球转基因作物种植面积仅有170万公顷，而到2008年则累计达到8亿公顷(Clive James，2008)。

到目前为止，已经有超过100种以上的转基因植物被商业化种植，其中最广泛的是大豆、玉米、棉花和油菜。例如，2008年全球大豆种植面积约为九千五百万公顷，其中转基因大豆占70％份额(Clive James，2008)。

美国孟山都公司生产的抗草甘膦除草剂转基因大豆(Roundup Ready Soybean)，简称RR大豆，是世界上最早获准进行商业化种植的转基因大豆品种(1994年5月获准在美国进行商业化种植)。它的抗草甘膦除草剂特性是通过转入cp4-epsps基因并正确表达而获得的。

大豆类食品制品及相关产品一直以来都是为人民群众所热爱的。可以预见，随着我国经济的进一步发展，人民群众生活水平的提高，大豆类食品制品及相关产品的需求量必然上升。而国内的大豆产量与市场需求间一直存在着一定的差距。自1996年开始，中国成为大豆、豆粕和粮油的全面净进口国，现已是世界上最大的大豆进口国。2008年中国大豆总产量为1656万吨，而进口量已达到惊人的3743万吨(罗维燕，2009)。有证据表明，2008年，美国、阿根廷和巴西转基因大豆的种植率分别高达91.9％、90.4％和70.3％，而来自美国、巴西和阿根廷的大豆约占我国总进口大豆份额的90％(梁克红等，2009)。

转基因作物自面世以来，就其安全性各界一直存在着较大的争议。我国于2001和2002年相继颁布实施《农业转基因生物安全管理条例》及《农业转基因生物标识管理办法》，以此来规范农业转基因生物的监督监管机制。本发明不仅为转基因大豆及其深加工产品中转基因成份的检测提供了一种可行性高且可靠的方法，也为食品安全领域中的转基因安全性评价和标识管理提供了有力的支撑，具有很高的实际应用价值。

发明内容：

本发明目的：提供一种适用于快速检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法及试剂盒，以克服蛋白层次检测时间长、成本高和易受产品基质影响等缺点。另外，本发明以内源基因的检测结果为参照来验证转基因大豆及其深加工产品中外源转基因成份检测结果的正确性，在一定程度上能有效避免PCR过程中的污染及假阳性问题，从而能够更有效的对检测结果做出科学和准确的判断。

本发明目的的实现：

一种检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法，包括：提取样品中总DNA、PCR扩增反应、琼脂糖凝胶电泳检测，其特征在于：

大豆内源lectin基因上游引物为SEQ ID N_O：1，下游引物为SEQ ID N_O：2；

cp4-epsps基因上游引物为SEQ ID N_O：3，下游引物为SEQ ID N_O：4。

在本发明中：在PCR扩增反应体系中，PCR反应缓冲液、Taq DNA聚合酶、引物和DNA之间的体积比为50∶1∶2∶1；在扩增反应中，变性：94℃3～10min；扩增：94℃30s，40～65℃30s，72℃20～60s；循环：30～45；后延伸：72℃10min。

在本发明中：PCR反应缓冲液由10×PCR buffer、MgCl₂、dNTP和dd H₂O组成，它们的体积比为5∶3∶1∶41。

在本发明中：所述的琼脂糖凝胶电泳检测是指制备琼脂糖凝胶，60～100V恒压电泳，30～60min。EB染色后于凝胶成像仪上观察和拍照。