[发明专利]表达盒、其转基因鱼及应用

权利要求书

1.一种表达盒，其包含：

编码报告蛋白的报告核苷酸序列；

从青鳉鱼分离的雌激素反应5′-调控核苷酸序列，其中所述调控核苷酸序列可操作地连接到所述报告核苷酸序列的5′端，以在雌激素或雌激素样化合物存在下诱导报告蛋白表达；和

可操作地连接到所述报告核苷酸序列3′端的3′-调控区。

2.如权利要求1所述的表达盒，其中所述5′-调控核苷酸序列分离自黑点青鳉鱼。

3.如权利要求2所述的表达盒，其中所述5′-调控核苷酸序列源自黑点青鳉卵壳蛋白H基因的启动子区，所述卵壳蛋白H基因具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列。

4.如权利要求3所述的表达盒，其中所述源自黑点青鳉卵壳蛋白H基因的启动子区的5′-调控核苷酸序列包含选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4组成的组的核苷酸序列。

5.如权利要求1所述的表达盒，其中所述报告蛋白是自体荧光蛋白。

6.如权利要求5所述的表达盒，其中所述自体荧光蛋白选自增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、绿色荧光蛋白(GFP)、蓝色荧光蛋白(BFP)、黄色荧光蛋白(YFP)和红色荧光蛋白(RFP)组成的组。

7.如权利要求1所述的表达盒，其中所述3′-调控区包含mRNA聚腺苷酸化信号。

8.如权利要求7所述的表达盒，其中所述mRNA聚腺苷酸化信号是青鳉鱼卵壳蛋白H基因的3′-侧翼区，所述青鳉鱼选自黑点青鳉和日本青鳉组成的组。

9.如权利要求8所述的表达盒，其中所述卵壳蛋白H基因的3′-侧翼区包含卵壳蛋白H基因的3’-UTR(非翻译区)和聚腺苷酸化尾序列。

10.如权利要求1所述的表达盒，其中所述3′-调控区包含SEQ ID NO：5的核苷酸序列。

11.一种转化载体，其包含权利要求1的表达盒。

12.一种宿主细胞，其是由权利要求1的表达盒转导的宿主细胞。

13.一种水生动物的转基因细胞，所述转基因细胞包含至少一个权利要求1的表达盒。

14.如权利要求13所述的转基因细胞，其中所述水生动物选自青鳉种和鲤种组成的组。

15.如权利要求14所述的转基因细胞，其中所述青鳉种选自黑点青鳉和日本青鳉组成的组。

16.一种转基因鱼，其包含：

至少一个权利要求1的表达盒，

其中所述转基因鱼在接触包含雌激素或雌激素样化合物的液体介质时表现出可观测的标记，并且

其中所述可观测的标记包含由至少一个表达盒表达的报告蛋白。

17.如权利要求16所述的转基因鱼，其中所述可观测的标记是在体内可见的。

18.如权利要求16所述的转基因鱼，其中所述鱼是半咸水鱼。

19.如权利要求18所述的转基因鱼，其中所述半咸水鱼是黑点青鳉鱼。

20.如权利要求16所述的转基因鱼，其中所述鱼处于选自由胚胎阶段、幼体阶段和成体阶段组成的组的发育阶段。

21.如权利要求16所述的转基因鱼，其中所述鱼是雄性成体鱼。

22.一种用于检测液体介质中雌激素或雌激素样化合物存在的转基因鱼的制备方法，所述方法包括：

使用权利要求1的表达盒转化非转基因鱼，从而获得包含至少一个所述表达盒的转基因鱼。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述鱼是黑点青鳉鱼。

24.一种筛选液体介质中雌激素物质的方法，所述方法包括：

使权利要求16的转基因鱼接触用于检测雌激素物质的存在的液体介质；和

测定所述转基因鱼是否表现出通过诱导报告基因表达产生的可观测的标记，

其中所述可观测的标记的存在表明所述液体介质包含雌激素物质。

25.如权利要求24所述的方法，其中所述液体介质包括已添加有目标测试物质的水样。