[发明专利]转甜菜碱醛脱氢酶基因耐盐碱玉米环境安全性检测方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种转甜菜碱醛脱氢酶BADH基因耐盐碱玉米环境安全性检测方法，属于分子生物学领域。

背景技术：

利用转基因技术将外源抗逆基因引入玉米是显著提高玉米抗逆能力、大幅度提高产量和改善品质的最现实有效的途径。美国等发达国家已利用转基因技术培育出一批转基因玉米新种质或新品种(Cathy，2007)，中国是世界第二大玉米生产国，常年种植2400万hm2，转基因玉米即将进入生产阶段。

虽然自然界的物种之间一直存在基因交流，但是转基因技术克服了种间甚至是类群间的界限，植物、微生物、动物甚至是人类的基因都可以在各自的基因组内相互转化。这样做的结果是转基因作物的基因流所携带的可能就不仅仅包括自身的基因，也包括来自其他生物的外源基因。这种不确定性及其可能存在的后果也是目前生物安全论争的焦点。

因此在关注转基因玉米所带来的巨大社会、经济和生态效益的同时，也带来了一系列的生物安全问题。其中比较令人关注的是外源基因的逃逸，从而对生态环境造成一定的危害(Kiran等，2002，2005)。外源基因的逃逸可以通过传播种子和传播花粉两种方式发生，而花粉传播是其中最主要的方式(Hardy等，2004；Kenta等，2004)。花粉介导的基因流及其生态后果是转基因作物生态风险评估及其生态影响监测的主要内容。

有关转基因玉米通过花粉发生基因逃逸的研究大多集中于转基因玉米借助风媒或虫媒与非转基因玉米及其野生亲缘种进行异花授粉，形成含有转基因的杂交后代。与野生亲缘种相比，转基因玉米更容易与其同种作物杂交，并由此产生相关的环境、生产、贸易和人畜健康等安全性问题。多数研究表明，玉米花粉的漂移率从距离花粉源10～20m以外开始逐渐降低，最大漂移距离为200m(Chilcutt等，2004；Ma等，2004)，也有在300m仍检测到0.02％异交率的报道(Stevens等，2004)。现有的证据显示，基因漂移和花粉流之间存在明显的相关性。而关于抗除草剂玉米外源基因逃逸的研究，我国仅有路兴波等(2005)和邸宏(2008)两篇报道。而有关转基因玉米花粉中外源基因表达蛋白在土壤中的降解存留情况的研究尚未见报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种转甜菜碱醛脱氢酶BADH基因耐盐碱玉米环境安全性检测方法，以玉米花粉为检测对象，与不同PH值盐碱土混合后，进行保温保湿处理，不同时间段检测甜菜碱醛脱氢酶BADH的活性，达到建立一个操作简便、结果可靠的耐盐碱转甜菜碱醛脱氢酶BADH基因玉米环境安全性检测方法的目的。

上述的目的通过以下的技术方案实现：

转甜菜碱醛脱氢酶基因耐盐碱玉米环境安全性检测方法，该方法包括如下步骤：

(1)玉米的种植：挑选发育良好转甜菜碱醛脱氢酶BADH基因耐盐碱玉米种子，采用盆栽方式种植，盆深45-55cm，盆直径45-55cm，常规管理；

(2)盐胁迫处理：在玉米拔节期开始直至玉米植株抽雄，每隔4-7天灌浇氯化钠水溶液，每次灌浇1000ml/盆；

(3)采集花粉与盐碱土混合进行花粉降解试验：玉米开始散粉后收集0.1g花粉与3.15g土壤充分混匀，放入盖子上打有Ф2mm小孔的50ml离心管中，加入0.965ml蒸馏水，放进人工气候箱，保持黑暗，进行花粉降解试验；

(4)甜菜碱醛脱氢酶活性检测：在分解30天时取样，提取甜菜碱醛脱氢酶，采用分光光度计法测定甜菜碱醛脱氢酶活性。

所述的转甜菜碱醛脱氢酶基因耐盐碱玉米环境安全性检测方法，步骤(2)中所述的氯化钠水溶液的质量百分浓度为0.3％。

所述的转甜菜碱醛脱氢酶基因耐盐碱玉米环境安全性检测方法，所述的人工气候箱设定的参数为温度25℃，湿度65％-85％。

有益效果：

(1)本发明对转基因玉米盐胁迫浓度、玉米花粉与盐碱土混合比例、玉米花粉与盐碱土混合后保温保湿处理条件和时间等条件，进行了详细的研究，确立了适宜的范围，建立了一种转BADH基因耐盐碱玉米环境安全性检测方法。

(2)本发明步骤简单，以转基因玉米花粉作为评价对象，试验材料易于获取，试验周期短，效率高。

(3)本发明的转BADH基因耐盐碱玉米环境安全性检测方法具有适用范围广的特点，适用于耐盐碱转基因玉米的环境安全性检测。

附图说明：

附图1是本发明的步骤框图。

附图2是不同土壤pH下，BADH蛋白降解的速度曲线。

具体实施方式：

实施例1：