[发明专利]软骨细胞仿生培养模型及其制备方法

权利要求书

1.一种软骨细胞仿生培养模型，其特征在于，通过下述方法制备而成：

1)制取中心带有钻孔的表层软骨骨块模型，用PBS清洗，用γ射线消毒；

2)将1.1％-1.3％海藻酸钠加至细胞培养板各孔，然后将步骤1得到的骨块模型放入细胞培养板各孔；

3)向孔中和骨块模型周围加入0.1-0.15MCaCl₂溶液，使海藻酸钠溶液凝固；

4)吸出步骤3加入的CaCl₂溶液，用细胞培养液润洗。

2.根据权利要求1所述的仿生培养模型，其特征在于，所述步骤1中，表层软骨取自于牛、猪马或羊。

3.根据权利要求1所述的仿生培养模型，其特征在于，所述步骤2中，将1.2％海藻酸钠加至细胞培养板。

4.根据权利要求1所述的仿生培养模型，其特征在于，所述步骤3中，向孔中和骨块模型周围加入0.1MCaCl₂溶液。

5.根据权利要求1所述的仿生培养模型，其特征在于，所述步骤3中，凝固后，在4℃冰箱放置2h。

6.根据权利要求1所述的仿生培养模型，其特征在于，步骤4中，所述的细胞培养液通过下述步骤制成：向灭菌后的培养瓶中加入180mL DMEM原液，20mL融化的FBS，再加入1000X的PS 200μL，整个过程保持无菌环境。

7.制备权利要求1-6任一项所述软骨细胞仿生培养模型的方法，包括下述步骤：

1)制取中心带有钻孔的表层软骨骨块模型，用PBS清洗，用γ射线消毒；

2)将1.1-1.3％海藻酸钠加至细胞培养板，然后将步骤1得到的骨块模型放入细胞培养板各孔；

3)向孔中和骨块模型周围加入0.1-0.15MCaCl₂溶液，使其凝固；

4)吸出步骤3加入的CaCl₂溶液，用细胞培养液润洗。

8.权利要求1-6任一项所述的仿生培养模型在培养软骨细胞中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，包括下述步骤：

1)向培养模型中各孔加入原代PⅠ代软骨细胞；

2)在37℃，5％CO₂培养箱中培养1h使细胞贴壁；

3)待细胞贴壁后，向细胞培养板的各孔中加入权利要求6所述的细胞培养液，使其没过培养模型上层软骨，培养。