[发明专利]犬瘟热、犬细小病毒和犬腺病毒I型三联活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种犬瘟热(Canine distemper virus)、犬细小病毒(Canine parvovirus)和I型犬腺病毒(Canine adenovirus)三联弱毒活疫苗，包括：微生物保藏号是CGMCC No.3810的犬瘟热弱毒疫苗株，微生物保藏号是CGMCCNo.3841的犬细小病毒弱毒疫苗株和微生物保藏号是CGMCC No.3809的I型犬腺病毒弱毒疫苗株。

2.按照权利要求1所述的三联弱毒活疫苗，其特征在于：所述犬瘟热弱毒疫苗株，犬细小病毒弱毒疫苗株或I型犬腺病毒弱毒疫苗株的毒价≥10^4.5TCID₅₀/头份。

3.权利要求1所述犬瘟热、犬细小病毒和犬腺病毒I型病毒三联弱毒活疫苗的制备方法，包括：(1)分别培养微生物保藏号是CGMCC No.3810的犬瘟热弱毒疫苗株，微生物保藏号是CGMCC No.3841的犬细小病毒弱毒疫苗株和微生物保藏号是CGMCC No.3809的I型犬腺病毒弱毒疫苗株，得到病毒液；(2)对病毒液进行病毒滴定，混合，过滤，加入冻干保护剂，冻干，即得。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述犬瘟热弱毒疫苗株的培养包括：选择经无菌，支原体检测阴性的生长良好的CEF单层，倒去培养液后，换以含2％毒种的细胞维持液，调整pH值7.2～7.4，置33℃培养；当CPE达到70％时收获。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述犬细小病毒弱毒疫苗株的培养包括：将毒种按细胞维持液量的3％同步接种于经无菌，支原体检测阴性的生长良好的CRFK单层，调整pH值为7.2～7.4，置37℃培养；待70％细胞出现CPE即可收获。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：犬腺病毒I型弱毒疫苗株的培养包括：选择经无菌，支原体检测阴性的生长良好的MDCK单层，倒去培养液后，换以含2％毒种的细胞维持液，调整pH值7.2～7.4；置37℃培养；当CPE达到70％时收获。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的冻干保护剂的配制包括：(1)明胶：8g；蔗糖：40g；无离子水：100ml；调整pH值为6.8～7.0；(2)116℃灭菌40min，即得。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：将病毒液与冻干保护剂按9∶1的体积比例进行混合。