[发明专利]一种表达载体的制备方法

权利要求书

1.一种制备表达载体的方法，其包括基因重组的步骤，该基因重组的步骤将含有小鼠Musashi1基因启动子的目的DNA片段插入到基础载体中含有或者插入的报告基因的上游，所述报告基因由小鼠Musashi1基因启动子调控表达。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述含有小鼠Musashi1基因启动子的目的DNA片段包含小鼠Musashi1基因翻译起始点。

3.如权利要求2所述的方法，其中，所述小鼠Musashi1基因启动子的目的DNA片段为包含小鼠Musashi1基因翻译起始点上游5′非翻译区的823bp序列，以及翻译起始点下游的316bp基因片段。

4.如权利要求1所述的方法，其中，所述含有小鼠Musashi1基因启动子的目的DNA片段具有SEQ ID NO：1的序列。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述报告基因为绿色荧光蛋白报告基因。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述基因重组步骤之前包括含有小鼠Musashi1基因启动子的目的DNA片段的获取，该获取步骤包括：(1)分析小鼠Musashi1基因启动子序列的位置和长度；(2)设计所要克隆的小鼠Musashi1基因启动子片段的引物对；(3)PCR扩增，纯化扩增产物，即获得小鼠Musashi1基因启动子目的片段。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述引物对为SEQ ID NO：2-3所示的寡核苷酸：

SEQ ID NO：2：5′-cttcttcgagagtgctctgctgactta-3′；

SEQ ID NO：3：5′-gcactctcgaggaaggagatgactacatga-3′；

或者SEQ ID NO：2～3所示的寡核苷酸的互补链。

8.如权利要求1～6所述的方法，其中，所述基础载体为pAcGFP1-1质粒载体，所述含有小鼠Musashi1基因启动子的目的DNA片段和小鼠Musashi1基因启动子在该质粒载体的插入区域均含有多克隆酶切位点。

9.如权利要求8所述的方法，其中，所述基因重组步骤包括以下步骤：

(1)将含有Musashi1基因启动子的目的DNA片段和pAcGFP1-1质粒载体的双酶切；

(2)酶切后将含有Musashi1基因启动子的目的DNA片段和pAcGFP1-1质粒载体的酶连；

(3)筛选酶连后的重组质粒转化到宿主细胞进行大量扩增。

10.如权利要求8所述的方法，其中，所述多克隆酶切位点为Ecl136II和BamHI双酶切位点。