[发明专利]耐低温石油降解菌株、培养方法、培养基及其应用

权利要求书

1.Paracoccus sp.D17菌，属于革兰氏染色阳性副球菌属，保藏编号为CGMCC No.3718。

2.如权利要求1所述的菌生长条件为：pH 6.0-7.0，温度10-30℃，优选25℃。

3.Paracoccus sp.D24菌，属于盐单孢菌属，保藏编号为CGMCC No.3717。

4.如权利要求1或3所述的菌的培养方法，包括：

(1)驯化步骤

将石油污染土样利用生理盐水溶解，接入原油无机盐含油废水液体培养基中，在10℃摇床培养10-20天，后取定量培养液继续培养10-20天，得到菌液，在上述培养过程中分批加入共5-10ml灭菌原油；

(2)分离纯化步骤

对步骤(1)中所得菌液进行梯度稀释，涂布至原油无机盐含油废水固体培养基上，培养3-5天，划线培养；

(3)反复驯化、划线培养

反复驯化、划线培养，直至得到多株纯菌。

5.如权利要求4所述的菌的培养方法，还包括生长步骤，其中，所述Paracoccus sp.D17菌的生长步骤的条件为：pH 6.0-7.0，温度10-30℃，优选25℃。

6.如权利要求1或3所述的菌的筛选用液体培养基，每1000ml培养基液体由0.5g NaCl，0.1g K₂HPO₄，0.1g NH₄H₂PO₄，0.1g(NH₄)₂SO₄，0.02gMgSO₄·7H₂O，0.3g KNO₃，700-900ml油田废水和余量的超纯水组成。

7.如权利要求6所述的液体培养基，其特征在于，每1000ml培养基液体还包括8～12g灭菌原油。

8.如权利要求1或3所述的菌的筛选用固体培养基由下述方法得到：在每1000ml由0.5g NaCl，0.1g K₂HPO₄，0.1g NH₄H₂PO₄，0.1g(NH₄)₂SO₄，0.02gMgSO₄·7H₂O，0.3g KNO₃，700-900ml油田废水和余量的超纯水组成的培养基液体中另外加入15～20g琼脂，再在培养基表面均匀涂20～30μl灭菌原油。

9.如权利要求1或3所述的菌在降解石油烃中的应用，优选在10-30℃温度下进行降解，更优选所述石油烃为烷烃，进一步更优选所述石油烃为正十四烷或正十八烷。

10.如权利要求1或3所述的菌在土壤或水体石油污染的生物修复中的应用，其中，优选在10-30℃温度下进行修复。