[发明专利]一种人C-反应蛋白胶体金免疫层析法定量检测试纸

说明书

 

技术领域

本发明属人C-反应蛋白的定量检测领域，特别是涉及利用胶体金免疫层析法进行人C-反应蛋白的定量检测。

 

背景技术

C反应蛋白（C-reactiveprotein,CRP）是由Tillet和Francis于1930年在一些急性病患者的血清中发现，是环状五球体蛋白，属于Oligomeric钙结合蛋白，相对分子质量约120,000，由5个相同的单体以非共价键构成，是炎性淋巴因子白介素-6、白介素-1、肿瘤坏死因子刺激肝脏上皮细胞合成的。因为它能和肺炎链球菌的荚膜C多糖起沉淀反应而得名。CRP主要用作细菌感染和疾病活动性的指针。当体内有急性炎症、细菌感染、大面积组织破坏、恶性肿瘤时，很快就会出现CRP升高，而治愈时，又很快就降低到正常范围，这是一种急性期反应蛋白(acutephasereactantprotein)。

目前，临床上检测CRP主要用免疫浊度法、单向免疫扩散法、胶乳凝集法等方法。中国专利申请CN1040438提供了一种快速检测C-反应蛋白的试剂，是由羊抗人CRpZgCT、聚苯乙烯乳胶、甘氨酸缓冲液、蒸馏水、叠氮钠配制的一种胶乳凝集法检测试剂。该胶乳凝集法快速简单，但只是半定量，敏感性低，不适合大部分需要定量的临床检测。中国专利申请CN1769894公开了一种高敏C反应蛋白测定试剂盒，包含试剂R－1为结合有羊抗人C－反应蛋白抗体的苯乙烯胶乳溶液，胶乳颗粒直径为200－240nm，置于适当的缓冲液中；试剂R－2为结合有羊抗人C－反应蛋白抗体的苯乙烯胶乳溶液，胶乳颗粒直径为30－70nm，置于适当的缓冲液中。该胶乳凝集反应法提高了灵敏度，可进行低含量水平的测定。

由于上述方法都需要特殊的仪器设备，故操作人员和环境有一定的要求，而且检测费时，繁琐，不利于广泛普及。基于免疫层析法的CRP检测试纸或检测卡不需要特殊的仪器设备，便于携带运输，操作简便，层析试剂比液体的检测试剂容易保存。其中，比较适合于临床快速检测且方法稳定的是胶体金免疫层析技术，以其简便快速的优势在临床医学检验中占据一席之地。中国实用新型专利CN201096787涉及一种C-反应蛋白颜色颗粒诊断试纸，通过利用快速免疫层析法，定性地检测临床标本(全血/血清/血浆)中的CRP。该实用新型是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、颜色颗粒固定垫、样品吸液层、MAX线组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条C-反应蛋白单克隆抗体试验线和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板与颜色颗粒固定垫相互交叠连接，在颜色颗粒固定垫上压有样品吸液层。但是，该方法无法实现CRP的定量检测。

中国专利申请CN101320041《一种快速定量检测C－反应蛋白的胶体金法及其应用》提供了一种胶体金免疫渗滤法来定量检测CRP的方法。反应原理为固相双抗体夹心法的金标免疫斑点渗滤试验，待测样品经40－480倍稀释后与免疫胶体金在液相均质介质中混和均匀，再转加到反应板上，其中所含的、已与免疫胶体金在一起的待测物能为膜上固定的抗待测物另一决定簇的单抗或多抗特异性地捕获，呈红色斑点，斑点色泽与样品中CRP浓度呈正比。但是，由于该专利所公开的检测方法为胶体金免疫渗滤法，而非胶体金免疫层析法，故配套的试剂盒需要由CRP金标液冻干品、反应板、样品稀释液、封闭液和塑料滴管等组成，组分较多，造成检测操作比较繁琐。由于含有金标液冻干品，该试剂须在检测前室温平衡30分钟，耗费了等候检测的时间，使检测报告的及时性较差。此外，更为关键的是，该试剂盒的检测范围相对有限，在检测高浓度CRP样品中容易出现HOOK效应，必须将待测样品进行合适的稀释，如其所公开的，稀释40－480倍，但是，往往在初次检测时，无法知道究竟该稀释多少倍，即在样品的初始浓度无法知道的情况下，容易产生高浓度样品稀释倍数不够的情况，于是，检测结果可能因为HOOK效应而偏低。这样的缺陷使该方法在定量检测中的可靠性降低。

常规CRP免疫层析定性检测试纸由两条线组成，沿样品走向由下端至上端分别为检测线、质控线。测定时，若检测线和质控线均出现红色可判定为阳性，若仅质控线出现红色为阴性，质控线不显色则为无效。这样布置的检测试纸一般很难用于定性检测，要在同类的检测试纸上实现定量检测，必须通过特殊的设计，才能实现定量检测。

 

发明内容

所要解决的技术问题