[发明专利]一种同步检测血清样本中多种抗体的蛋白悬浮芯片及其制备方法和使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种同步检测血清样本中西尼罗抗体、土拉抗体、登革热抗体、禽流感抗体的蛋白悬浮芯片及其制备方法和使用方法。 

背景技术

西尼罗热是由西尼罗病毒感染引起的急性传染病。人感染西尼罗病毒多数表现为隐性感染，约140～300个感染者中有1个临床病例。其症状为突然发热、头痛、背痛、肌肉痛等。发烧可表现为双波热，约半数病人可见皮疹。出疹时间在发热期或发热末期。皮疹可为玫瑰样疹或斑丘疹，部位主要在颈背和上肢，持续时间约为1周。可见咽炎和恶心、呕吐、腹泻、腹痛等胃肠道症状。病程一般为3～6天，然后迅速恢复，预后良好，少数病人特别是老年人可表现为无菌性脑膜炎或脑膜脑炎，伴有颈强直、呕吐、神志不安、嗜睡、四肢发抖、痉挛、局部麻痹和昏迷等，病死率较高，达5～12％。 

土拉菌病是由土拉弗朗西斯菌引起的多种野生动物、家畜及人共患病，亦称野兔热。临床上以体温升高、淋巴结肿大、脾和其他内脏坏死为特征，土拉菌可以被用作生物战中的致病病菌，感染者会出现高烧、浑身疼痛、腺体肿大和咽食困难等症状。 

登革热是登革热病毒引起、依蚊传播的一种急性传染病。临床特征为起病急骤，高热，全身肌肉、骨髓及关节痛，极度疲乏，部分患可有皮疹、出血倾向和淋巴结肿大。 

禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性传染病，也能感染人类，人感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重的肺炎，严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡，病死率很高，通常人感染禽流感死亡率约为百分之33。此病可通过消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等多种途径传播，区域间的人员和车辆往来是传播本病的重要途径。 

免疫学方法酶联免疫实验(ELISA)中利用抗原与抗体特异性反应来检测抗原或抗体主要有由双抗原夹心测抗体、双抗体夹心测抗原、竞争法、间接法等。间接法测抗体的原理是特异性抗原结合到固相载体上， 然后和待检血清中的相应抗体结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记二抗与免疫复合物中的抗体结合形成酶标记二抗-抗体-固相抗原复合物，加底物显色，判断抗体含量。 

悬浮芯片(suspension array)也称液相芯片，是20世纪70年代美国Luminex公司研制出的新一代生物芯片技术，利用带编码的微球体作为载体，流式细胞仪作为检测平台，对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模测定。目前，该技术已广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、抗体筛选及受体与配体的识别分析等领域。 

目前发展的悬浮芯片主要是基于实验室检测方法的建立和方法评价及优化，以缩短检测时间，降低检测成本。但是悬浮芯片方法是否能够同步检测人血清中的西尼罗抗体、土拉抗体、登革热抗体、禽流感抗体，其定量检测能力如何，尚缺乏模型和评价。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种同步检测血清中西尼罗抗体、土拉抗体、登革热抗体、禽流感抗体的蛋白悬浮芯片，该芯片包括：包被有捕获抗原的编码微球，作为捕获抗原的有西尼罗E蛋白、土拉fopA蛋白、登革热E2蛋白、禽流感H5蛋白，生物素标记的二抗和SPA作为捕获抗体，链亲和素-藻红蛋白及相关缓冲溶液。 

本发明提供上述检测西尼罗抗体、土拉抗体、登革热抗体、禽流感抗体的蛋白悬浮芯片的制备方法，其特征在于，在相关缓冲溶液中，025号编码微球用西尼罗E蛋白抗原包被、028号编码微球用土拉fopA蛋白抗原包被、031号编码微球用登革热E2蛋白抗原包被、032号编码微球用禽流感H5蛋白抗原包被，用生物素标记的二抗为羊抗兔IgG或/和Biotin-SPA，用链亲和素-藻红蛋白(SA-PE)作为信号检测物，所述编码微球优选025、028、031、032号编码微球。