[发明专利]一种以毛囊干细胞和成纤维细胞为基础的毛囊重建方法

权利要求书

1.一种毛囊重建方法，其以毛囊干细胞和成纤维细胞为基础进行毛囊重建，包括以下步骤：

1)培养扩增毛囊干细胞；

2)培养扩增成纤维细胞；

3)将步骤1)培养扩增的毛囊干细胞与步骤2)培养扩增的成纤维细胞混合，接种至需要毛囊重建的部位。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述步骤1)中的毛囊干细胞来源于成年大鼠毛囊隆突部；优选地，所述毛囊干细胞是利用器官培养的方法，采用William’s E完全培养基对毛囊进行培养并分离纯化而制备的。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，其中所述步骤2)中的成纤维细胞来源于新生大鼠真皮成纤维细胞；优选地，所述成纤维细胞是通过37℃孵育表皮2小时后，加入含10％胎牛血清的DMEM培养基进行培养而制备的。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，其中所述步骤3)中毛囊干细胞与成纤维细胞按照2∶1的细胞数量比混合，并用William’s E完全培养基重悬细胞，制备成单细胞悬液；优选地，其中所述的William’s E完全培养基不含胎牛血清，含200单位/毫升的青霉素钠，200单位/毫升的硫酸链霉素。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，其中所述步骤3)中毛囊干细胞与成纤维细胞混合后用硅室接种至需要毛囊重建的部位；优选地，所述细胞的接种量为1.1×10⁷个毛囊干细胞和6×10⁶个成纤维细胞。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括用绿色荧光蛋白标记毛囊干细胞的步骤；优选地，所述绿色荧光蛋白标记毛囊干细胞是通过慢病毒感染法。

7.权利要求1至6中任一项所述的方法在皮肤损伤治疗中用于重建皮肤和毛囊的用途；优选地，所述皮肤损伤包括烧伤或烫伤。

8.权利要求1至6中任一项所述的方法重建的表皮和毛囊。