[发明专利]一种以幼嫩花梗为外植体的萱草组织培养两步成苗的快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种萱草的组织培养两步成苗的简易快繁方法，特别是涉及到以幼嫩花梗为外植体的萱草组织培养。

背景技术

萱草(Hemerocallis.sp)是百合科多年生的草本植物，该植物“观为花，食为菜，用为药”，具有用途广泛、适应性强、栽培容易、管理简单、收益快、效益高、经济寿命长等特点。所有这些，对于美化环境，增进人民体质，开发山区经济，增加出口等均具有重要意义，市场对其需求不断增加。在自然界，该属植物可采用播种、分株等方式进行繁殖，由于该植物杂种性强，种子繁殖难以保持优良性状，而且部分品种结实率低或种子萌芽率低，因此生产中很少采用有性繁殖的方式。分株繁殖较为常用，且植株容易存活，但因其萌蘖能力不强、增殖速度慢，一般1株萱草每年仅可繁殖1～5株，因而难以适应市场商品化生产的需求。

植物组织培养作为上世纪发展起来的一门新技术，已一跃成为一种大规模批量工厂化生产种苗的新方法，并在花卉生产上得到越来越广泛的应用。采用该技术繁殖萱草，可大幅提高种苗的质量和产量，是解决优良品种大量繁殖的最有效途径，不仅可以克服常规繁殖方法的不足，提高繁殖系数，加快其繁殖速度，还可打破季节局限，实现工厂化育苗，满足市场的需求。目前，萱草的组培育苗主要通过“愈伤组织的诱导、产生不定芽→芽的增殖→组培苗生根”三个阶段来完成，并根据不同阶段配制相应培养基进行转瓶，步骤较为繁琐，生产成本较高。因此，如何简化培养步骤，降低生产成本成为促进萱草组培苗生产的当务之急。

发明内容

本发明的目的是针对现有组织培养技术中存在的问题，提供一种以幼嫩花梗为外植体的、用“丛生芽的诱导→组培苗生根”两步法实现萱草的组织培养快繁方法，该方法可以大量快速地繁殖出品质优良的萱草组培苗。

为达到上述目的，本发明采用的解决方案是：先将作为外植体的萱草幼嫩花梗进行消毒处理，然后将其切割成1～1.5cm后接种到诱导及分化培养基上；2.5～3个月后选择苗高4～6cm、4片叶子以上的无菌苗转接到生根培养基上进行生根培养；当组培苗每株生根3条以上、不定根长达2～4cm时，打开瓶盖，在室内炼苗3～4天后，将组培苗从培养瓶中取出，洗去培养基，将其移栽至灭菌的栽培基质中；

上述诱导及分化培养基为：以MS为基本培养基，每升添加6-苄氨基嘌呤(6-BA)2～10mg、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)0～2mg、α-萘乙酸(NAA)0.2～1mg、琼脂4.5g和蔗糖30g，pH值调节至5.8；

上述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，每升添加NAA 0.1～2.0mg、琼脂4.5g和蔗糖15～30g，pH值调节至5.8；

上述诱导及分化培养条件为：温度25±1℃，光照时间为12小时/天，光照强度在愈伤组织阶段为1000lx，待诱导出后幼苗为2000lx；

上述生根培养条件为：温度25±1℃，光照时间为12小时/天，光照强度为2200lx。

上述解决方案中可采用的外植体消毒处理的灭菌剂有70～75％乙醇、次氯酸钠溶液、氯化汞溶液等，本发明优选的方法是先用加入少量洗衣粉的水浸泡5分钟后，用流水冲洗2～3小时；在无菌条件下(在水平超净工作台上)，将花梗在75％的酒精中浸泡10秒后，在0.1％的升汞溶液中浸泡15分钟，用无菌水仔细冲洗8次。

上述解决方案中的最佳诱导及分化培养基为：以MS为基本培养基，每升添加6-BA 4mg、2，4-D 1mg、NAA 0.5mg。采用这种激素配比的培养基配方，经过2.5～3个月的培养，不定芽的增殖率最高，可以达到5.2，而且芽生长迅速、健壮；

上述解决方案中的最佳生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，每升添加NAA 1.0mg、琼脂4.5g和蔗糖15g。采用这种配比的培养基进行生根培养时，生根率较高，且根系粗壮；

上述解决方案中将组培苗移栽至灭菌的培养基质中(等比例的壤土、粗沙和蛭石混匀)，并适当遮光，并保持温度在18～22℃，相对湿度为80～85％，保持一周左右后逐渐去掉遮阴设施、降低空气湿度，待幼苗适应环境后即可进入大田管理，植株成活率可达90％。本发明通过合理调节激素的种类配比和浓度，得到了健壮的萱草组培苗，经过3～4个月的培养，其增殖率达5.2。移栽至大田后，生长良好，达到生产要求。

因此，本发明具有的优点是：能在短时间内大量繁殖出优质的萱草组培苗，从而满足大规模生产的需求。另外实施本发明方法，减少了配制培养基和转瓶的步骤，因此简单易行、生产成本降低。

具体实施方式