[发明专利]一种检测恩诺沙星的光激化学发光免疫分析法及其试剂盒

权利要求书

1.一种检测恩诺沙星ENR的光激化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于由白色不透明微孔板(1)，恩诺沙星标准品(2)，包被有ENR-OVA的发光微粒(3)，兔抗ENR抗体冻干品(4)，生物素化羊抗兔抗体冻干品(5)，和包被有链霉亲和素的感光微粒(6)组成。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于包被有ENR-OVA的发光微粒(3)的制备：在离心管中加入1mg发光微粒，加入12.5μL 1％Tween-20，0.05mgENR-OVA人工抗原，10μL的25mg/mL硼氢化氰钠溶液，用0.1M、pH6.0的2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液将体积补充到200μL，37℃避光振荡反应48小时，加入10μL 0.3M、pH 5.0的羧甲氧基胺半盐酸盐溶液封闭未结合位点，37℃避光孵育1小时，离心纯化，洗去未反应的试剂后，分离得到包被有ENR-OVA的发光微粒，稀释后备用。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于ENR标准品(2)的配制：ENR标准品浓度分别为：0ng/mL，0.1ng/mL，1ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，从ENR纯品中稀释得到，稀释液为蒸馏水。

4.一种用权利要求1所述的试剂盒检测ENR的方法，其特征在于取包被有ENR-OVA的发光微粒加入到白色不透明微孔板；加入ENR标准或处理好的样品到各自的微孔中，然后各孔顺序加入兔抗ENR抗体、生物素化羊抗兔抗体进行标记免疫反应；接着暗处加入包被有链霉亲和素的感光微粒进行反应，反应后检测光信号，对照标准曲线计算被测样品中的ENR含量。

5.根据权利要求4所述的检测ENR的方法，其特征在于操作为：

取20μL包被有ENR-OVA的发光微粒加入到白色不透明微孔板；加入20μL的ENR标准或处理好的样品到各自的微孔中；加20μL兔抗ENR抗体；继续加入20μL生物素化羊抗兔抗体，37℃孵育15分钟；暗处加175μL包被有链霉亲和素的感光微粒，37℃暗处孵育15分钟，反应后在光激化学发光检测仪上检测光信号，从标准曲线计算被测样品中的ENR含量。