[发明专利]食蟹猴急性肝衰模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及急性肝衰动物模型的建立方法，具体涉及利用食蟹猴建立急性肝衰模型的方法。

背景技术

急性肝功能衰竭(acute liver failure，ALF)是指原来不存在肝硬化的患者26周内出现凝血异常和不同程度的意识改变，其病程短、预后极差，有报道显示病死率高达80％。目前，唯一有效的治疗方法是原位肝移植。然而，目前因为器官短缺，有三分之一的急性肝衰患者在等待器官移植的过程中死亡。作为急性肝功能衰竭患者肝移植或肝再生的桥梁，人工肝支持系统是非常必要的。

人工肝支持系统已被国内外学者证明具有良好的临床治疗效果。人工肝支持系统可以分为非生物人工肝支持系统和生物人工肝支持系统，其中最有发展前景的是生物人工肝支持系统。生物人工肝是利用培养的生物活性成分(肝细胞)置于体外生物反应器中，患者血液/血浆流过生物反应器，通过半透膜或直接接触与培养肝细胞进行物质交换，为肝功能衰竭患者提供肝脏支持功能。在生物人工肝的研究中，为评价生物人工肝的安全性和有效性，稳定的急性肝功能衰竭模型的建立是必不可少的。

然而，目前没有一种已建立的动物模型能够适应这种要求。因此，有必要提供一种急性肝衰动物模型，以满足科学研究的需求。

发明内容

本发明的目的在于提出一种食蟹猴急性肝衰模型的建立方法，所述方法包括经食蟹猴颈外静脉注射D-氨基半乳糖的步骤。

在本发明的实施方式中，所述D-氨基半乳糖为0.1g/ml的D-氨基半乳糖的葡萄糖溶液的形式。在优选的实施方式中，所述D-氨基半乳糖的葡萄糖溶液的pH为6.8。

在本发明的另一实施方式中，所述D-氨基半乳糖的葡萄糖溶液在10分钟内被注射完毕。

在本发明的另一实施方式中，所述D-氨基半乳糖以0.3g/kg体重的剂量被注射进入食蟹猴。

在本发明的另一实施方式中，在注射之前，在颈外侧中段且与颈外静脉垂直处作2～3cm的横切口，切开皮肤皮下组织，结扎出血点，并用弯血管钳沿静脉方向分离皮肤组织，将静脉游离1.5～2cm。

由D-氨基半乳糖导致大量肝细胞坏死所诱导的急性肝功能衰竭过程被认为是最接近人的急性肝衰竭病程。本发明提供的食蟹猴急性肝衰模型的建立方法，是通过食蟹猴颈外静脉注射D-氨基半乳糖溶液，以导致大量肝细胞坏死，建立食蟹猴急性肝衰模型。根据该模型，对不同的食蟹猴进行分析对比，实际试验结果表明，通过颈外静脉注射D-氨基半乳糖溶液后，食蟹猴出现了一些与肝功能下降相关的临床表现，如食欲下降、活动减少、恶心呕吐、嗜睡以及昏迷，最终死于肝功能衰竭，生化检测、死亡后的尸体解剖及光镜、电镜病理学改变也证实了这一实验结果，从而说明本发明以实验手段建立了食蟹猴急性肝衰模型，该模型能够很好地用于生物人工肝系统的安全性和有效性的临床前评价。

附图说明

图1-3分别为本发明实施例1中食蟹猴的肝脏、肾脏和脑部切片在光镜下观察到的图片；

图4-6分别为本发明实施例1中食蟹猴的肝脏、肾脏和脑部切片在电镜下观察到的图片；

图7-9分别为本发明实施例2中食蟹猴的肝脏、肾脏和脑部切片在光镜下观察到的图片；

图10-12分别为本发明实施例2中食蟹猴的肝脏、肾脏和脑部切片在电镜下观察到的图片。

具体实施方式

以下将结合具体实验来阐述本发明的具体实施方法以及本发明的优点。

研究表明，D-氨基半乳糖是一种肝细胞毒性药物，可在短时间内引起严重肝损害，其作用机制是：①通过抑制肝细胞的RNA和浆膜蛋白合成造成肝细胞坏死；②肝细胞坏死与细胞外Ca ²⁺大量进入细胞内有关；③肠外因素，包括胃肠通透性增加，细菌的移位和内毒素等都增加了D-氨基半乳糖的肝脏毒性。

大动物模型是医疗新产品开发的必需资料。在生物人工肝进行大动物肝功能衰竭的实验治疗过程中，大动物的血浆将与人的肝细胞直接接触，这可能诱发动物抗人的免疫反应；考虑到降低免疫因素的需要，本发明采用灵长类食蟹猴为模型动物。灵长类动物是目前最理想的临床前实验数据来源，在形态结构、组织结构、免疫、生理和代谢等方面与人类高度近似的优点，但开展并不广泛，数据资料比较稀缺。食蟹猴肝功能衰竭模型的建立目前尚未有成熟的方法，也尚未有利用生物人工肝进行救治的研究报道。从临床表现、血液生化指标、组织学改变等各个生理病理方面模拟人类的急性肝功能衰竭过程，将有利于我们探讨生物人工肝治疗急性肝衰竭的方法，有利于评价生物人工肝的安全性和有效性，这不仅有重要的理论价值，也有着潜在的应用前景。