[发明专利]RBD蛋白在制备SARS病人辅助诊断试剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及RBD蛋白在制备SARS病人辅助诊断试剂中的应用。

背景技术

严重急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndromes，简称SARS)由一种新型的冠状病毒(SARS-CoV)感染引起，导致以发热、干咳、胸闷为主要症状，严重者出现快速进展的呼吸系统衰竭，是一种新的呼吸道传染病，传染性极强、病情进展快速。2002/2003年的SARS全球爆发引起8000多人感染，导致约10％的感染者死亡，严重威胁人类健康和社会安定。现有的研究认为，SARS病毒可能来源于动物，由蝙蝠经果子狸作为中介而传人，但有待于进一步研究。因此，SARS-CoV重现引起再次爆发的可能性不能完全排除，开发有效的SARS诊断试剂及其他防治手段仍很重要。

SARS-CoV感染的实验室检测方法主要有(1)聚合酶链反应(PCR)：用于检测SARS-CoV的病毒核酸，包括逆转录PCR、实时PCR、套式PCR和增强的实时PCR等；(2)特异性抗体检测：用于检测血清中针对SARS-CoV的特异性抗体的方法有ELISA、间接IFA I等。血清抗体的特异性检测不但用于临床实验室诊断，也可用于流行病学调查。目前市场上销售的试剂盒主要采用裂解的SARS-CoV全病毒(viral lysates)为抗原，检测灵敏度和特异性都有待于提高。同时，制备病毒存在严重的安全隐患。发展基因工程重组抗原用于SARS-CoV的血清学检测十分必要。

类似其它的冠状病毒，SARS-CoV是一个有囊膜的正链RNA病毒，基因组接近30Kb，除编码多聚酶外，编码的结构蛋白主要有包膜刺突蛋白S(spike)、膜蛋白M(membrane)和E(envelope)、核衣壳蛋白N(nucleocapsid)。冠状病毒的S蛋白主要负责病毒与细胞受体的结合、膜融合及进入，但同时也是诱导中和抗体的主要免疫原。

同其它冠状病毒的S蛋白一样，SARS-CoV的S蛋白属于I型跨膜糖蛋白，由S1和S2两个结构域组成。S1位于整个蛋白的N末端，负责病毒与靶细胞的受体结合。已经证明血管紧张素转换酶(ACE2)是SARS-CoV的功能受体。位于S1中间区域的片段是受体结合结构域(RBD)，由318-510位的193个氨基酸组成，对介导病毒感染至关重要。S2位于整个蛋白的C末端，主要包含融合肽和两个七残基重复序列(HR1和HR2)等功能片段，主司病毒和靶细胞之间的膜融合，也是病毒感染的关键部位。

发明内容

本发明的目的是提供RBD蛋白在制备SARS病人辅助诊断试剂中的应用。

本发明提供了RBD蛋白的新用途，即RBD蛋白在制备SARS病人辅助诊断试剂中的应用；所述RBD蛋白为如下(a)或(b)：

(a)氨基酸序列如序列表的序列1所示的蛋白；

(b)序列表的序列2自5’末端第37至753位核苷酸所示DNA编码的蛋白。

所述RBD蛋白可采用如下方法制备：

(1)将序列表的序列2所示的DNA插入表达质粒，得到重组质粒；

(2)将步骤(1)得到的重组质粒转染哺乳动物细胞，得到重组细胞；

(3)培养重组细胞，得到RBD蛋白。

常规的表达质粒和哺乳动物细胞均可采用。所述表达质粒具体可为pcDNA4/myc-His A。所述哺乳动物细胞具体可为293T细胞。

基于以上用途，所述RBD蛋白可用于制备SARS病人辅助诊断试剂盒。

本发明还保护一种辅助诊断SARS病人的试剂盒，包括RBD蛋白；所述RBD蛋白为如下(a)或(b)：

(a)氨基酸序列如序列表的序列1所示的蛋白；

(b)序列表的序列2自5’末端第37至753位核苷酸所示DNA编码的蛋白。

所述RBD蛋白的编码基因具体可如序列表的序列2自5’末端第37至753位核苷酸所示。

所述RBD蛋白可采用如下方法制备：

(1)将序列表的序列2所示的DNA插入表达质粒，得到重组质粒；

(2)将步骤(1)得到的重组质粒转染哺乳动物细胞，得到重组细胞；

(3)培养重组细胞，得到RBD蛋白。

常规的表达质粒和哺乳动物细胞均可采用。所述表达质粒具体可为pcDNA4/myc-His A。所述哺乳动物细胞具体可为293T细胞。