[发明专利]一种环氧化物水解酶基因、载体、工程菌及其应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及环氧化物水解酶(epoxide hydrolase，EH)基因及其重组表达载体、基因工程菌，及其在制备重组环氧化物水解酶中的应用。

(二)背景技术

EH是一类广泛存在于植物、昆虫、哺乳动物以及微生物体内的水解酶，能选择性水解外消旋环氧化物生成具有光活性的环氧化物和二醇。微生物来源的EH不对称拆分外消旋的环氧化物，具有底物谱和酶的来源广泛，对映体选择性高，不需要金属离子和辅酶，菌体可以通过发酵大量得到，在非水介质中也能保持较高催化活性等特点。

近年来，人们已在多种微生物中发现了环氧化物水解酶，如Rhodococcus equi，Rhodococcus ruber，Nocardia，Mycoplana rubra，Bacillus megaterium，Diplodia gossipina，Streptomyces strains，Rhodotorula glutinis，Bacillus subtilis，Sphingomonas echinoides，Rhodotorula araucariae，Rhodosporidium toruloides，Agrobacterium radiobacter，Mycobacterium tuberculosis，Aspergillus niger等。其中，部分环氧化物水解酶的基因已被克隆并在不同的宿主中表达(大肠杆菌、毕赤酵母、耶氏酵母等)，获得产酶活力提高的基因工程菌，随后用于不对称拆分外消旋环氧化物，在手性环氧氯丙烷的制备中也有应用。

手性环氧氯丙烷是一种重要的有机合成中间体，在医药、化工、农药等领域应用广泛。化学法拆分外消旋环氧氯丙烷需要使用重金属，会造成环境的污染。生物法拆分具有反应条件温和、环境友好的优点，但是具有高效拆分外消旋环氧氯丙烷活性的微生物报道较少，因此，通过基因工程技术获得能选择性水解外消旋的环氧氯丙烷的EH基因，构建高表达的基因工程菌有着重要的意义。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种环氧化物水解酶基因及其重组表达载体、基因工程菌，及其在制备重组环氧化物水解酶中的应用。

本发明采用的技术方案是：

一种环氧化物水解酶基因，具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列：

1     GGTCTCCTCG AGAAAAGAGC AACCCATACC TTTGCTAGTC CTCCAACAAG ATTCACAGTA

61    GATATCCCTC AATCCGAATT AGATGAGCTG CATTCTCGAC TAGATAAGAC AAGATGGCCA

121   GCAACCGAGA TAGTTCCAGA GGATGGAACC GATGACCCTA CGGCATTCGG CTTGGGGGCT

181   GGACCAACCT TGCCACTTAT GAAAGAGTTA GCTAAGGGAT GGAGAGAATT CGATTGGAAG

241   AAAGCTCAAG ATCACTTGAA CACCTTTGAA CACTACATGG TCGAAATCGA GGATCTATCT

301   ATACACTTTT TGCACCATAG GTCTACCAGA CCTAATGCTG TCCCTCTAAT ACTATGTCAT

361   GGTTGGCCTG GTCACTTTGG AGAGTTCTTG AATGTGATTC CATTGTTGAC TGAGCCAAGT

421   GACCCATCCG CTCAAGCTTT TCACGTGGTG GCTCCATCAA TGCCTGGATA TGCTTGGAGT

481   TTACCCCCAC CATCCTCTAA GTGGAACATG CCCGACACCG CCAGAGTGTT CGATAAGCTT

541   ATGACGGGAC TTGGTTATGA GAAATATATG GCTCAAGGTG GTGATTGGGG ATCTATTGCA

601   GCTCGTTGCC TTGGTTCATT GCATAAGGAC CACTGTAAGG CTGTGCACCT AAACTTTCTG

661   CCAGTGTTCC CACCAGTCCC CATGTGGCTA ATAAATCCAC ATACTCTACT GGCATGGGCT