[发明专利]一种厌氧氨氧化菌的分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有厌氧氨氧化活性菌的分离方法。

背景技术

厌氧氨氧化(Anaerobic ammonia oxidation，ANAMMOX)技术由于具有高效、低耗和环境友好等特性已在废水处理方面受到研究者们的广泛关注。与传统硝化-反硝化生物脱氮方法相比，厌氧氨氧化工艺具有以下优点：厌氧氨氧化菌为自养菌，无需外加有机物作为电子供体，既可节省费用，又可以防止二次污染：在厌氧氨氧化反应中，只需要将氨厌氧氨氧化成亚硝酸盐，相比较传统硝化-反硝化过程中需要投加酸碱药剂，而厌氧氨氧化反应为近中性反应，生物产酸量很低，因此可以节省中和药剂费用；由于厌氧氨氧化菌生长缓慢，所以污泥产量极少，可以大大节约污泥处理处置费用。厌氧氨氧化技术能有效克服传统生物脱氮工艺的缺点，因此在废水生物脱氮领域具有良好的开发前景。

厌氧氨氧化这种生物脱氮技术的研究历程虽已有十余年的历史，但至今仍未广泛应用于工程实践。目前已经分离到的厌氧氨氧化菌均是采用密度梯度离心法得到的。密度梯度离心法是纯化病毒常用的方法，并不是菌株常用的分离方法。使用密度梯度离心法分离菌株，对实验室的等级要求较高，不宜普及。本发明涉及一种典型的微生物分离方法，比现有的密度梯度离心法分离厌氧氨氧化菌简单、快速。

发明内容

为了解决上述现有技术存在的不足之处，本发明的目的在于利用一种典型的微生物分离方法，比现有的密度梯度离心法分离厌氧氨氧化菌相比具有简单、快速的特点。

为了达到上述目的，本发明通过以下方案来实现：

本发明实施例提供一种厌氧氨氧化菌的分离方法，包括：

采集原料：采集颗粒污泥为原料，将所述颗粒污泥制成菌悬液；

初筛富集培养：对制成的所述菌悬液进行初筛富集培养得到初筛培养物；

复筛鉴定培养：对所述初筛富集培养得到的初筛培养物进行复筛鉴定培养，对复筛鉴定培养后得到的培养物进行检测，若检测合格则培养物的菌株即为厌氧氨氧化菌。

通过本发明实施例提供的技术方案可以看出，本发明实施例中以采集的颗粒污泥为原料，制成菌悬液后，依次经初筛富集培养和复筛鉴定培养后，即可分离得到厌氧氨氧化菌。该方法步骤简单，可实现从颗粒污泥快速分离厌氧氨氧化菌，具有简单、快速的优点。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步具体的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

本实施例提供一种厌氧氨氧化菌的分离方法，相比现有通过密度梯度离心法分离厌氧氨氧化菌具有简单、快速的优点，该方法具体如下：

采集原料：采集颗粒污泥为原料，将所述颗粒污泥制成菌悬液；可采用取自上流式厌氧污泥床中的颗粒污泥溶液为原料，用超声波将颗粒污泥溶液中的颗粒污泥破碎后，制成菌悬液。

初筛富集培养：对制成的所述菌悬液进行初筛富集培养得到初筛培养物；具体是将所述菌悬液转入初筛厌氧氨氧化富集培养基中，采用焦性没食子酸法，该焦性没食子酸法具体是：在干燥无菌的玻璃板或培养皿盖上，铺设一层灭菌脱脂棉或纱布，将焦性没食子酸设置在所述脱脂棉或纱布上；向所述焦性没食子酸上滴加氢氧化钠溶液后，将所述玻璃板或培养皿盖覆盖于装有已接种所述菌悬液的初筛厌氧氨氧化富集培养基的培养皿的皿底上，使设有焦性没食子酸和氢氧化钠溶液的所述脱脂棉或纱布全部罩住培养皿的皿口，以溶化的石蜡或凡士林液密封培养皿的皿底与玻璃或皿盖的接触处，使所述菌悬液在密闭的由焦性没食子酸与氢氧化钠溶液反应形成的厌氧环境下在初筛厌氧氨氧化富集培养基中进行培养。在25～35℃温度下厌氧培养10～15天，培养后得到初筛培养物。

上述初筛富集培养中，所用的初筛厌氧氨氧化富集培养基由下述各原料按重量份组成：蒸馏水1000000份、碳酸氢钾400～600份、磷酸氢二钠25～30份、七水硫酸镁200～400份、氯化钙120～140份、亚硝酸钠130～150份、硫酸铵130～150份、微量元素I 0.5～2份、微量元素II 0.5～2份和酵母膏或葡萄糖贮备液0.5～2份。

上述初筛厌氧氨氧化富集培养基中的微量元素I由下述各原料按重量份组成：蒸馏水1000000份、乙二胺四乙酸4000～6000份和硫酸亚铁4000～6000份。