[发明专利]用于梨衰退植原体实时荧光PCR检测的引物、探针及其方法

权利要求书

1.用于梨衰退植原体实时荧光PCR检测的引物、探针，其特征是：含有一条特异性循环探针和一对引物：

（1）探针LST Probe：5’-(FAM) ATTCTGACTGTA (Eclipse)-3’

（2）引物LST Primer-F：5’-ACTCTGACCGAGCAACGCC -3’

         LST Primer-R：5’- GATAACGCTTGCCCCCTATG -3’

其中：方框内为RNA碱基。

2.根据权利要求1所述的用于梨衰退植原体实时荧光PCR检测的引物、探针，其特征是：其合成方法是：首先在基因库中搜集全部植原体及有代表性细菌的16srDNA核酸序列，采用DNASTAR软件进行序列比对，找出梨衰退植原体与其他植原体的基因差异位点，设计出实时荧光PCR循环探针及引物，并于生物公司合成。

3.根据权利要求1所述的用于梨衰退植原体实时荧光PCR检测的引物、探针，其特征是：其LST Probe特异性验证：将梨衰退植原体、2种以上检疫性植原体及2种以上不同属的细菌DNA作为模板进行LST Probe特异性验证，PCR反应体系：

2×Cycleave   PCR Reaction Mix12.5 μlCycleave Primer Mix（10uM）1 μlCycleave Probe（3uM）1 μlDNA1 μldH₂O9.5 μlTotal25 μl

PCR反应条件：预变性95℃ 10sec；变性95℃ 5sec，退火55℃ 10sec，延伸72℃ 15sec，45cycles；LST Probe特异性验证通过后，即表明该引物及探针可应用于杏褪绿卷叶植原体的检测。